小鼠小脑颗粒神经元的原代培养与鉴定

本研究通过体外分离培养及鉴定原代小鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neurons,CGNs),为神经科学研究提供原代神经元细胞模型。取生后第7天的ICR乳鼠小脑,在解剖体视镜下剥离脑膜及血管,经刀片切碎、0.25%胰酶消化、移液器吹打、70μm尼龙滤网制备单细胞悬液,差速贴壁后接种于新鲜配置的培养基。倒置相差显微镜观察不同时间CGNs的形态变化。采用神经元的标记蛋白微管相关蛋白-2(microtubule associated protein 2,MAP2),星形胶质细胞的标记蛋白胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),小胶质细胞的标记蛋白(type 3 complement receptor,CR3/CD11b)进行免疫荧光检测培养的原代CGNs纯度。原代培养CGNs接种20 min后即贴壁良好,培养24 h后细胞伸出突起,培养第7天神经元成熟,形成丰富的轴突,树突和胞间突触连接。经免疫荧光鉴定,CGNs纯度可达95%以上。成功体外分离培养出高纯度的原代CGNs,可应用于CGNs的体外研究。     

分析EST寻找小鼠胸腺基质细胞表达基因

网上生物信息量的膨胀导致新基因寻找手段的改变,借助mRNA差异显示技术获得的17个表达序列标签（EST）,通过对美国国家生物技术信息中心（NCBI）的非冗余序列库（NT）和小鼠EST库的BLAST同源检索,发现有4个序列与已知基因高度同源,其中的HDPs和Eps8两个基因是首次在小鼠胸腺基质细胞中发现,它们可能与T细胞在胸腺内的发育分化有关,其它EST则为新基因,本结果也为下一步新基因的克隆及功能研究提供了有益的线索。     

动物细胞的微囊固定化培养

动物细胞培养的目的是多方面的,如:科研应用;作为病毒的宿主生产疫苗;获得细胞分泌的产物(抗体、干扰素、促红细胞生成素、tPA等)或细胞本身。尽管动物细胞培养的成本和复杂性要大于微生物的培养,但由于真核基因遗传及表达系统有着原核细胞无法替代的优越性:如蛋白质翻译后的加工过程,包括糖基化,二硫键形成,肽键剪切等,致使许多有天然活性的大分子只能借助于动物细胞表达。鉴于生物安全性原因,用动物细胞表达生产的临床应用生物制品更易被接受。 对生物制品日益迫切的需求是动物细胞大量培养技术发展的动力之一。而重组DNA技术与细胞生物     

产尿激酶原CHO工程细胞无血清培基的研究

近年来随着无血清培基研究的日益深入及其应用的逐步推广,无血清培基(SFM)的优点已普遍地人们所认识。就SFM在生产生物活性蛋白的应用而言,SFM成分明确、质量一致、蛋白含量低,不仅有利于提高细胞产品生产的稳定性,使产品易于纯化,同时也可使不同细胞株能各自在最有利其生长或最有利于表达目的产物的环境中持续高密度培养。因而,随着越来越     

产尿激酶原CHO工程细胞无血清培基的研究

在分析产尿激酶原CHO工程细胞对培基中氨基酸和糖利用的基础上,对DMEM：F12(1：1)进行初步优化。采用正交实验设计建立了无血清培基11G—SG—SFM和11G—SF—SFM。用11G—SG—SFM悬浮培养11G细胞,细胞增殖速率与含5％小牛血清DMEM: F12或CHO-s-SFM相当。用11G—SE—SFM培养11G细胞,细胞增殖缓慢,但有利于提高11G细胞表达pro—uK的水平,pm—UK的表达水平比含5％小牛血清的DMEM：F12培养提高80％左右。     

一种简便的X光片与凝胶准确复位的方法

ＬｉａｎｇＰ等人于 1992年建立的ｍＲＮＡ差别显示技术(ｄｄＰＣＲ)是迄今研究及发现基因表达差异的首选方法之一[1 ] 。以同位素示踪的ｄｄＰＣＲ在应用当中需要将在Ｘ光片上显示出的差别带从原测序凝胶上回收供进一步分析 ,Ｘ光片是否能准确与凝胶对准是回收成功的关键 ,本文提供了一种简单有效的方法供同行参考。1　材料与方法1.1　材料小鼠胸腺基质细胞株 ,由北京大学医学部Ｔ细胞免疫中心提供 ;α 32 ＰｄＣＴＰ( 10 μｉ μｌ)购自北京亚辉公司 ;Ｘ光片为天津感光材料厂产品 ;测序仪为ＢＩＯＲＡＤ公司产品。1.2　ｄｄＰＣＲ采用Ｃｌ…