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谷氨酸棒状杆菌质粒pXZ 10145的限制酶图谱和嵌合质粒的组建 总被引:5,自引:2,他引:3
从谷氨酸棒状杆菌中已经分离到质粒pxzl0145,该质粒带有氯霉素抗性。通过电子显微镜和BamH I酵切后在1%琼脂糖凝胶电泳上测定pXZl0145质粒的大小为5.3kb。用Bam—HI、PstI、EcoRI、saII等限制酶进行酶切,并用BamH I+sa1 I、BamH I+Pst I、Pst I+sal I、EcoR I+Pst I、EcOR I+BamH I等双重酶切,得到pxzlol45限制性内切酶的图谱。证明BamH I和Pst I为单一酶切点。将pxzl0 145与pBR322利用BamH I切点连接得到一嵌台质粒pxz34。这一质粒能在大肠杆菌中复制,在大肠杆菌中表现有氨苄青霉素和氯霉素的抗性,但是抗氯霉素的能力大大降低,只抗2Y/ml。 相似文献
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在基因工程技术的研究中,如何改善转化
的有效性是一个非常重要的研究课题,它直接
影响到实验的成败。1970年Mandel等[51发现
经氯化钙处理的E. coli细胞可以吸取I噬菌
体DNA, 1972年Cohen等[3,证明氯化钙处理
过的细胞对于质粒DNA也是一个很有效的受
体。1979年Dagert等〔‘,报道了延长氯化钙处
理时间能提高质粒DNA的转化效率4-6倍。
而目前在E. coli克隆化系统中基本上仍沿用
Cohen转化法。
本文报道我们对Gagert方法作了某些改
进,使转化效率进一步提高20多倍,为提高工
作效率提供了有效的方法。 相似文献
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