中国野生毛葡萄芪合成酶基因克隆及表达分析

采用RT-PCR技术克隆中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因,命名为VqDSTS1,并进行序列及表达模式分析.结果表明:VqDSTS1基因cDNA编码区全长为1 179bp,GenBank登录号为JQ342086,编码392个氨基酸;氨基酸序列分析表明,VqDSTS1含有芪合成酶基因家簇的特征识别序列‘IPNSAGAIAGN’和‘GVLFGFG-PGLT’;序列比对显示,VqDSTS1与其他葡萄种质的芪合成酶氨基酸序列一致性在95.2%～98.7%之间;半定量RT-PCR分析表明,VqDSTS1受白粉病诱导表达,呈双峰模式.为进一步研究中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因家族的表达及功能分析提供了基础.     

百合基因转化直接分化受体系统的建立

以东方百合(L ilium orien ta l hybrids)“索邦”作为研究材料,通过高频再生系统的建立和抗生素敏感性实验建立了百合稳定高效试管苗小叶离体基因转化的直接分化受体系统.结果表明:鳞片诱导分化培养基以M S+6-BA 1.0 m g.L-1+NAA 0.1 m g.L-1为宜,试管苗小叶柄分化最佳培养基为M S+6-BA 2.0 m g.L-1+NAA 0.3m g.L-1,试管苗鳞片叶分化最佳培养基为M S+6-BA 1.0 m g.L-1+2,4-D 0.3 m g.L-1;确定了试管苗不同部位适宜的抗生素筛选浓度,卡那霉素筛选浓度小叶柄为80 m g.L-1,鳞片叶为120 m g.L-1,羧苄青霉素筛选浓度为300 m g.L-1.     

中国野葡萄新基因cDNA全长的克隆及序列分析

根据对中国野生葡萄华东葡萄株系白河-35-1在白粉病诱导下构建的cDNA文库中获得的1条EST序列设计特异引物,以总RNA逆转录产物为模板,进行SMART-RACE扩增。结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,并预测了蛋白质的理化性质、信号肽、酶与非酶分析、亚细胞定位以及蛋白质二级结构。结果表明,获得的中国野生葡萄新基因的全长序列为854 bp,其开放阅读框为585 bp,5′非编码区为107 bp,3′非编码区为162 bp;同源性比对表明该新基因推导的氨基酸序列与拟南芥RNA结合蛋白和水稻推定的半乳糖基转移酶的同源性分别为55%和63%,第8~82位氨基酸序列与RNA识别基序相类似,是一个典型的结构功能域;推导该基因表达产物为相对分子质量为21 801.27、等电点为6.86的不稳定蛋白,定位于细胞核,不包含信号肽,二级结构主要是无规则卷曲。