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出生后2~3d的昆明种乳鼠,经腹腔接种100个半数致死量的陈株汉坦病毒,每只0.05ml,于接种后1、2、4、6、8、10、12、14d处死动物,每个时间点3~6只不等,取其脑组织固定于4%的多聚甲醛中,石蜡包埋制备5μm的连续组织切片,每时间点取1~2例组织切片,用逆转录原位PCR(RT-ISPCR)方法检测组织中病毒S片段RNA,组织脱蜡后,经DNase、蛋白酶K、消化等予处理,用汉坦病毒RNAS片段特异的一对引物,在组织切片上进行病毒RNA的逆转录和PCR过程,直接将digoxigenin-11-dUTP掺入到扩增产物中,经过30个PCR循环后,用碱性磷酸酶标记的抗digoxigenin抗体免疫组化检测扩增产物,连续组织切片用digoxigenin标记的汉坦病毒M片段G2编码区RT-PCR扩增产物的和S片段特异性探针进行原位分子杂交并与RT-ISPCR结果进行比较,另外应用免疫组化检测该基因表达产物病毒核抗原(NP),结果,RT-ISPCR在病毒感染1d的乳鼠脑组织中检测到病毒RNA扩增产物,扩增产物定位于神经细胞胞浆内,而原位分子杂交和免疫组化检测阴性。在病毒感染2d及2d以后的乳鼠脑组织中RT-I 相似文献
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