FMLP诱导的嗜中性白细胞呼吸爆发与凋亡的关系研究

本文对fMLP诱导的嗜中性白细胞胞内钙浓度变化与凋亡的关系进行了研究。用膜受体激动剂fMLP和钙离子载体A23187诱导细胞内钙浓度升高,BAPTA螯合胞质钙。运用荧光显微镜,流式细胞仪,电泳等方法对培养细胞的凋亡百分率及细胞骨架变化进行了研究。结果表明:fMLP和A23187均有效地抑制了凋亡,而BAPTA促进了凋亡。对骨架测定表明随细胞凋亡微丝解聚明显,胞内钙升高抑制骨架解聚,胞内钙降低促进其解聚。故嗜中性白细胞凋亡过程中伴随有微丝的解聚,胞内钙浓度升高时凋亡被有效抑制,胞内钙浓度降低时促进了凋亡。     

一种改进的分离嗜中性白细胞的方法

报道一种从全血中分离嗜中性白细胞的方法.人血经过葡聚糖沉降,淋巴细胞分离液梯度分离,特殊分离液的洗涤和红细胞的溶胀后,得到了嗜中性白细胞.经瑞特氏染色和台盼蓝染色证明细胞纯度与存活率均在95％以上.以化学发光和细胞色素c还原法证明了细胞的高活力与膜受体的完整性.与国外的分离方法相比较,该方法简便易行,且分离效果好,是一种高效、经济的分离方法.     

嗜中性白细胞呼吸爆发与胞内外钙信号的关系研究

以膜受体激动剂ｆＭＬＰ和ＰＫＣ激活剂ＰＭＡ为刺激剂,ｆｕｒａ－２为荧光探针,分别用化学发光和荧光方法研究了嗜中性白细胞呼吸爆发与胞内外钙信号的关系。并以ｆｌｕｏ－３为荧光探针,在激光共聚焦显微镜上观测了呼吸爆发时的胞内钙信号的时间与空间变化。ｆＭＬＰ能够迅速引起胞内钙变化,而ＰＭＡ不引起胞内钙变化。在呼吸爆发启动时间上,ｆＭＬＰ明显短于ＰＭＡ,且呼吸爆发的强度更高,持续时间较短。比较胞内钙信号与呼吸爆发,胞内钙变化在启动时间,到达峰值时间和持续时间上均短于呼吸爆发时间。胞内无钙时,呼吸爆发完全被抑制。胞外无钙时,呼吸爆发强度比有钙时低７０％左右。激光共聚焦显微镜观测发现：细胞在ｆＭＬＰ作用之后胞内钙库释放钙进入胞浆并向胞外流动。当胞外有钙时,胞内钙浓度降至最低后,由于外钙内流会使其再次缓慢上升;当胞外无钙时,胞浆钙浓度降至最低后不会再回升。结果提示胞内钙信号对细胞进入呼吸爆发有重要控制作用,而胞外钙主要用于维持细胞的呼吸爆发。