无血清培养基培养人全血制备染色体研究

无血清培养基培养人全血制备染色体研究谭湘陵,刘梅江苏省南通医学院生物学教研室,２２６００１通过人外周血的培养制备染色体是最常用的方法。常规培养基中含一定量的血清,血清的使用被认为必不可少,但也存在一定的弊端［１］。国外对于细胞无血清培养技术进行了广泛...     

人脊髓前角运动神经元190KD蛋白的初步研究

本研究采用ＳＤＳ凝胶电泳方法从人脊神经前根中分离出人脊髓前角运动神经元特有的蛋白—１９０ＫＤ。将该蛋白作为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经杂交瘤技术,获得了抗１９０ＫＤ蛋白的单克隆抗体。免疫细胞化学检测表明,１９０ＫＤ单抗与脊髓灰质前角神经元、前根及肌支发生阳性反应。实验结果提示,１９０ＫＤ蛋白分布在脊髓运动神经元胞体及脊神经的前根和肌支纤维中。     

通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达

克隆通育粳1号水稻乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)基因,并在原核系统中进行体外表达。取通育粳1号水稻幼根,提取总RNA,RT-PCR法扩增ADH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pGEX-4T-1表达质粒中。将质粒转化至BL21(DE3)宿主菌中,平皿培养,挑取阳性菌落培养,提取重组质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列。pGEX-4T-1-ADH/BL21进行常规LB扩大培养,IPTG(1 mmol/L)作用2、3和4 h诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。结果显示,插入质粒中的ADH片段序列和方向正确无误,表达蛋白分子量符合预期值42 kD,表达至最大值的诱导时间为3 h。因此,该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ADH的作用和应用生物工程法大量获得ADH奠定基础。     

通粳1号水稻乙醛脱氢酶基因的克隆及原核表达

目的：克隆通粳1号水稻乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase,ALDH）基因,并在大肠杆菌中进行体外表达。方法：提取通粳1号水稻幼根总RNA,RT-PCR法扩增ALDH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pET5a表达质粒中,转化BL21（DE3）宿主菌,平板培养筛选,挑取阳性菌落并提取质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列。含重组质粒的BL21（DE3）进行常规LB扩大培养,用不同浓度的IPTG作用不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。结果：质粒中插入的ALDH片段为1668bp,含有完整的开放阅读框架,序列与GenBank比较无差异,插入方向正确无误,表达蛋白分子量为61.8kDa左右,符合预期值,IPTG最佳诱导时间为3h,0.1mmol/L～0.8mmol/L浓度的IPTG作用效果无显著差异。结论：该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ALDH的作用和应用生物工程法大量获得ALDH奠定基础。     

PDGF-D、MPO与CD15在大肠癌中的表达及临床相关性研究

目的：探讨血小板源性生长因子D（PDGF-D）、髓过氧化物酶（MPO）YL粒细胞相关抗原（CD15）在大肠癌组织中的表达及其与临床特征之间的关系。方法：采用免疫组化染色方法检测88例大肠癌组织、72例大肠腺瘤组织及50例正常大肠粘膜组织中PDGF-D、MPO及CD15的表达情况。结果：PDGF—D、MPO、CD15在大肠癌组织中的阳性表达率分别为85．23％、63．64％、61．36％。PDGF—D、MPO在正常组、大肠腺瘤组和大肠癌组三者之间的表达均有显著性差异（P〈0．05）。CD15在正常组、大肠腺瘤组中的阳性表达率与大肠癌组中的阳性表达率有显著性差异（P〈0．05）,但在正常组与大肠腺瘤组中的阳性表达率无显著性差异（P〉0．05）。PDGF—D、MPO、CD15的表达在有淋巴结转移组织中的阳性率分别为92_31％、75．00％,73．08％;在无淋巴结转移组织中的阳性率分别为75．00％、52．78％,47．22％,三者在有无淋巴结转移组织中的阳性率均有显著性差异（P〈0．05）。PDGF．D、MPO、CD15在大肠癌中的表达与性别、年龄及组织分化程度均无相关（P〉0．05）。经Spearman相关性分析,PDGF—D及MPO在大肠癌的表达具有相关性（P〈O．05）。大肠癌中CD15与PDGF—D、MPO的表达无明显相关性（P〉0．05）：结论：PDGF—D、MPO与CDl5在大肠癌中的高表达,提示均参与了大肠癌的发生发展,可作为大肠癌恶性程度和侵袭转移的分子生物学标志物。     

呼吸重症监护病房2008年至2011年医院感染病原菌分布及危险因素分析

目的：对我院呼吸重症监护病房（RICU）临床分离的非重复性感染病原菌的耐药性进行调查,分析RICU院内感染的危险因素。方法：收集RICU 2008年-2011年临床分离的非重复性感染病原菌及相关临床资料分析医院感染的危险因素。结果：（1）2008-2011年RICU院内感染发生率为34.15%,每年分离的前3位病原菌均为鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌;（2）大肠杆菌连续4年ESBLs检出率为100%,四年间肺炎克雷伯菌ESBLs检出率最高达95.5%,葡萄球菌中MRSA检出率较高（〉89.6%）;（3）RICU院内感染以下呼吸道感染最为常见,其次为泌尿道感染,血液感染位于第3位;（4）多因素非条件logistic回归分析发现机械通气、住院时间〉15天及联合应用抗菌药物是RICU医院感染的危险因素。结论：（1）连续4年RICU感染病原菌以革兰阴性杆菌为主;（2）ESBLs和MRSA检出率较高,给临床抗感染治疗带来巨大的挑战;（3）机械通气、住院时间〉15天及联合应用抗菌药物是RICU医院感染的危险因素。     

基于孕激素受体基因的类人猿亚目的分子系统学研究

通过对类人猿亚目中部分种类的孕激素受体基因进行分析,重建类人猿亚目的 系统发育关系.扩增并测定了来源于14个属的类人猿亚目物种的孕激素受体编码区序列,并基于这一序列数据,分别采用邻接法、最大简约法和最大似然法重建了系统发育关系.除了阔鼻下目,3种方法构建的系统发生树的拓扑结构类似且各节点支持率高.重建的人猿超科和猴超科内部亲缘关系支持多数人所认可的分类系统.本研究为黑猩猩和人的姐妹群关系提供了证据,提示黑猩猩比大猩猩或其他猿猴更接近人类.阔鼻下目中蜘蛛猴科、卷尾猴科和僧面猴科三者之间的系统发育关系在本研究中未得到很好辨析.     

留学生医学遗传学教学初探

摘要: 医学留学生教育已成为中国高等教育中的一个重要组成部分。遗传学是医学留学生重要的必修课程。高等教育的国际化对医学遗传学的教学模式提出了挑战。文章主要讨论了留学生医学遗传学的教学现状, 详细阐述了我校印度籍留学生教学的特殊性, 总结了其中出现的问题, 并就如何迎接这些新的挑战, 有效地提高教学质量提出一些可行的建议。     

神经诱向生长因子18kD蛋白的纯化

提取与纯化诱向生长因子是神经生物化学研究中的一个重要课题．采用自然系统凝胶电泳,分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长作用的１８ｋＤ蛋白,再以等电聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养,揭示了ｐＩ为５．２的１８ｋＤ蛋白具有诱神经生长的作用．经高效液相色谱仪分析获得较纯的１８ｋＤ诱向因子．蛋白／多肽测序仪检测,１８ｋＤ蛋白Ｎ端氨基酸序列为：ＰＥＰＡＷＳＡＰＡＰ．     

一种简单实用的“CO_2培养箱”

细胞培养工作中有时需要用CO_2培养箱,但CO_2培养箱价格甚高,这里介绍一种非常简单而又实用的“CO_2培养箱”。将一只真空干燥器洗净,在放置变色硅胶的槽中放入1/5到1/3的饱和NaHCO_3溶液。去掉干燥器盖上的塞子,换上一只橡皮塞,塞上插入一只注射针尖,使干燥器内外通气。将培养