应用载体介导的RNAi技术抑制胰腺癌细胞K-RASAsn12的表达

为了研究载体介导的RNAi（RNAinterference）技术特异地抑制K-RASAsn12。（K-RAS第12位密码子突变形式为GAT）在胰腺癌细胞中的表达,合成两条编码针对K-RASAsn12。突变特异性短发夹RNA（shorthairpinRNA,shRNA）序列的单链DNA,并将其克隆到pSilenCircle栽体中,构建含目的基因片段的重组质粒pSC-K-RASAsn12。同法构建含GFP基因片断的重组质粒pSC-GFP做为对照。用其分别瞬时转染人胰腺癌AsPC-1细胞和BxPC-3细胞后,经半定量RT-PCR和Westernblot检测K-RAS的表达水平。结果表明构建的针对K-RASAsn12的编码突变特异性shRNA的质粒表达载体可特异的抑制胰腺癌细胞的K-RASAsn12。表达,但对野生型的K-RAS（K-RASwT）表达无影响。