叶酸靶向载顺铂羧甲基-β-环糊精纳米复合物的制备及对鼻咽癌的体外抑制效应

为达到鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NeC）的靶向化疗,该研究通过酰胺化反应和配位偶联技术制备叶酸（folicacid,FA）分子靶向载川页铂（cisplatin,CDDP）羧甲基-β-环糊精（carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM—β—CD）纳米复合物（FA-CM—β—CD—CDDP）,采用邻苯二胺（o-phenylenediamine,OPDA）比色法检测复合物中CDDP含量,紫外分光光谱检测FA含量,透射电镜观察复合物形态,激光粒度仪测定复合物粒径大小。荧光显微镜观察NPC叶酸受体（folatereceptor,FR）阳性HNE-1细胞及FR阴性CNE-2细胞对偶联FITC的复合物的吞噬及OPDA比色法检测细胞内CDDP的浓度。通过MTT法、集落形成实验和流式细胞术检测复合物对HNE-1细胞增殖能力和凋亡的影响。研究结果显示,复合物中偶联的FA和CDDP浓度分别为340gg／mL和2mg／mL,CDDP包封率达20．00％,复合物粒径均匀且大小为157．8nm。HNE-1细胞内见较多FITC,细胞内CDDP浓度为6．24ng／mL,而CNE-2细胞内FITC较少,细胞内CDDP浓度仅约2．01ng／mL。HNE-1生长抑制率在24h明显高于对照组（CM—β—CD—CDDP）,其IC50（4．80μg／mL）明显低于对照组（6．97μg／mL）,但当所载的CDDP终浓度达到16．00μg／mL时,两组抑制率均达到80％以上;作用48h两组抑制率无明显差异。在24h,当复合物的CDDP终浓度为1．00μg／mL时,HNE—1的集落形成率为33．21％,明显低于对照组（52．27％）。当复合物的CDDP终浓度为0．25μg／mL和1．00μg／mL时,HNE-1的凋亡率分别达12．65％和22．35％,明显高于对照组（6．91％和14.21％）。研究结果表明,成功构建的FA—CM—β—CD．cDDP纳米复合物能够靶向抑制FR阳性的NPC细胞增殖并促进其凋亡。     

鼻咽癌相关基因TP53、COL1A1、FN1的表达及意义

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)是我国发病率较高的头颈部恶性肿瘤,但其发病机制仍不清楚。本文采用生物信息学方法筛选NPC差异基因,通过免疫组化进一步分析其在NPC组织和慢性鼻咽炎(chronic nasopharyngitis, CN)组织中的表达及意义。首先,使用R语言从基因表达综合数据库(gene expression omnibus, GEO)和人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man, OMIM)中筛选出NPC差异基因,对这些基因进行基因本体论(gene ontology, GO)分析、京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)信号通路富集分析及蛋白相互作用(protein-protein interaction, PPI)分析,利用免疫组化实验检测相关基因在NPC组织和CN组织中的表达情况。结果显示,从GEO数据库中共筛选出257个NPC差异表达基因,其中上调基因50个,下调基因207个;从OMIM数据库检索到了2...     

共载TFPI-2及顺铂磁性纳米复合物的制备及其对鼻咽癌的治疗

构建共载组织途径抑制因子-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)及顺铂(cisplatin,CDDP)的磁性纳米(magnetic nanoparticles,MNP)复合物(MNP-CDDP/TFPI-2),研究该复合物对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的综合抑制效应。将前期制备的载CDDP磁性纳米颗粒(MNP-CDDP)和聚乙二醇单甲醚–聚乙烯亚胺(MPEG-PEI)TFPI-2静电吸附,制备MNP-CDDP/TFPI-2,通过红外光谱、透射电镜、激光粒度仪观察复合物的结构、粒径大小及电位,邻苯二胺(o-phenylenediamine,OPDA)法检测复合物中CDDP含量。通过流式细胞仪检测基因转染效率,分析磁性纳米复合物转染TFPI-2的情况;RT-PCR及Western blot法检测CNE-2细胞转染TFPI-2质粒后TFPI-2 m RNA和蛋白表达情况。采用CCK-8实验、流式细胞术及Matrigel侵袭实验检测MNPCDDP/TFPI-2对CNE-2细胞增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响。研究结果显示,纳米复合物成功合成,平均水动力学粒径151.2 nm,Zeta电位+14.5 m V,复合物中CDDP含量平均为120μg/m L,包封率33.3%。复合物所载TFPI-2质粒转染率22.7%±2.5%。CNE-2转染TFPI-2质粒后,胞内TFPI-2 m RNA和蛋白表达明显增加。MNP-CDDP/TFPI-2组细胞生长抑制率及凋亡率分别为34.8%和42.3%,明显高于MNP-CDDP组(27.1%、38.0%)和(MPEG-PEI)TFPI-2组(18.9%、16.2%)(P0.05)。Matrigel侵袭实验结果显示,纳米复合药物组穿膜细胞数为28±3个,明显低于对照组(P0.05),提示MNP-CDDP/TFPI-2组细胞侵袭和迁移能力降低。结果表明,本研究已成功构建携带TFPI-2表达基因及CDDP的MNP-CDDP/TFPI-2;体外实验显示,MNP-CDDP/TFPI-2对NPC细胞具有良好的综合抑制效应。