慢性粒细胞白血病细胞选择性培养和净化

近年来,随着体外净化方法的不断发展和完善,以及家庭的日益小型化,使得自体骨髓移植在治疗急性白血病方面越来越受到重视。但对慢性粒细胞性白血病(CML)至今仍未找到理想的净化骨髓的方法,从而使自体骨髓移植在CML中的应用受到很大的限制。 CML是起源于多能干细胞的肿瘤性疾病,疾病的发生、发展、转归、细胞生物学及分子生物学变化     

重组IL－6与IL－3或／和GM－CSF合用对正常BN大鼠粒单系体外造血的调控效应

本研究探讨了重组人ＩＬ－６与大鼠ＩＬ－３和／或小鼠ＧＭ－ＣＳＦ结合对正常ＢＮ大鼠粒单系体外造血的调控效应。结果表明,ＩＬ－６在１０００－４０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性刺激粒系造血祖细胞集落形成及骨髓细胞的ＤＮＡ合成,集落以ＧＭ型为主,其刺激活性低于ＩＬ－３或ＣＭ－ＣＳＦ。ｌＬ－６与ＩＬ－３和／或ＧＭ－ＣＳＦ的结合对粒单系集落形成及ＤＮＡ合成无协同或相加作用,甚至出现拮抗效应,但却显著增大集落。提示ＩＬ－６可能具有双向调控作用,促进早期造血细胞的增殖,拮抗其它因子对晚期粒单系造血的刺激作用;具有重叠生物效应的这３种细胞因子在调控造血时,它们之间的相互作用应是顺序的而不是同时的。     

干细胞因子：一个新的多功能协同因子

干细胞因子是新近发现的多功能生长－协同因子,根据来源不同分别命名为ＳＣＦ、ＭＧＦ、ＫＬ和ＳＬＦ。现已证明,它是ｃ－ｋｉｔ原癌基因产物的配基。目前该因子已被分离和纯化,并且克隆了其全长ｃＤＮＡ和染色体基因。ＳＣＦ最显著的生物学特性是协同已知造血因子调各系造血,具有良好的临床应用前景。     

人胎肝细胞分泌的低分子抑瘤物对白血病细胞的抑制作用

本工作证明了在胎儿组织中存在一类低分子天然肿瘤抑制物,它是胎儿组织细胞生成和分泌的,对瘤株细胞和原代白血病细胞有选择性抑制作用。初发期或复发期急性非淋巴细胞白血病患者的骨髓在体外液体培养条件下与肝细胞上清及其甲醇提取物共同孵育4d,可使所有病例的骨髓AML—CFU降低到不可检出的程度。因而,低分子天然抑瘤物是天然肿瘤免疫中的一个组成部分,它在肿瘤的诊断和治疗中有着深远的意义。     

利用IL－3／GM－CSF融合蛋白（PIXY－321）扩增脐血造血细胞方法的初步建立

利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法分离脐血ＣＤ３４＋细胞,并观察了ＩＬ３／ＧＭＣＳＦ融合蛋白（ＰＩＸＹ３２１）对脐血ＣＤ３４＋细胞的刺激作用。ＰＩＸＹ３２１对脐血ＣＤ３４＋细胞扩增作用大于ＩＬ３和ＧＭＣＳＦ单独及联合应用。在液体培养条件下,每毫升２０ｎｇＰＩＸＹ３２１可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为５－８天,扩增后造血祖细胞的数量可达扩增前的８－１０倍,从而初步建立了一种简单可行的脐血造血细胞扩增方法。     

GM—CSF和IL—3对脐带血CD34＋细胞植入骨髓基质的促进作用

利用抗ＣＤ３４单克隆抗体吸附磁性微球的方法分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋细胞,将其种入照射后的成年骨髓基质。比较ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及两者的联合对植入效率的促进作用。结果表明：经２ｈ铺展贴壁后,对照组只有３６％的ＣＤ３４＾＋细胞植入基质,而生长因子预处理组则有６８－８９．６％的ＣＤ３４＾＋细胞植入基质。在长期液体培养体系中则显示了植入ＣＤ３４＾＋细胞多的处理组造血重建快速而持久。表明ＧＭ－ＣＳＦ     

脐带血造血干/祖细胞体外分化为不同阶段红系祖细胞的动力学观察

目的:探讨体外培养脐带血单个核细胞定向诱导分化为不同阶段红系祖细胞的动力学变化情况。方法:用0.5%甲基纤维素沉降脐带血红细胞及人淋巴细胞分离液密度梯度离心法得到单个核细胞,在含EPO、SCF、IGF-1等细胞因子的无血清培养体系中诱导其定向分化为红系祖细胞,观察细胞增殖、存活率、细胞集落形成情况,并检测不同阶段细胞红系特异性表面标志CD71和CD235a的表达。结果:随着培养时间的延长,细胞数逐渐增多,14 d细胞可扩增140倍左右,收集诱导后的细胞进行瑞氏吉姆萨染色,可见大量红系祖细胞,诱导后的细胞集落形成能力强,形成的克隆大部分为红系集落。诱导过程中,14 d前CD71、CD235a的表达逐渐增高。按细胞表面标志表达的不同可将诱导的细胞分为4群,分别对应红系祖细胞的不同阶段;随着诱导天数的增加,各时间点细胞对应的早期红系祖细胞群(P2、P3)比例逐渐下降,中晚期红系祖细胞群(P4、P5)的比例逐渐上升。结论:无血清培养基添加细胞因子组合的红系诱导培养体系可较好地诱导扩增红系祖细胞,流式分选可获得相对均一而处于不同分化阶段的红系祖细胞群体。获得了红系祖细胞体外分化的动力学数据,为今后进一步优化红系诱导分化体系获得均一的红系祖细胞奠定了基础,并对未来利用干细胞制备均一的红系祖细胞应用于临床治疗有一定的指导作用。     

快速纯化重组腺联病毒的受体结合捕捉方法

【目的】建立用于重组腺联病毒(AAV)纯化的受体结合捕捉方法。【方法】将AAV受体的多囊肾病(PKD)结构域1和2与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,利用相变循环(ITC)纯化ELP-PKD融合蛋白;分别用昆虫和AAV-293细胞制备rAAV-GFP,与ELP-PKD融合蛋白共孵育后进行ITC,从沉淀复合物提取病毒DNA进行PCR检测;在优化条件下利用ELP-PKD蛋白结合捕捉rAAV-GFP,利用电子显微镜观察、免疫转印和细胞感染试验进行rAAV鉴定。【结果】ELP-PKD融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC纯化的蛋白纯度大于90%;ELP-PKD蛋白能特异结合rAAV-GFP,结合具有p H、温度和时间依赖性,受体结合捕捉方法可在1h内完成,从两种细胞纯化rAAV-GFP的回收率分别为58%和56%;rAAV-GFP洗脱具有p H和温度依赖性,洗脱rAAV-GFP的回收率分别为46%和44%;纯化rAAV-GFP具有AAV的典型形态和结构蛋白。【结论】建立的ELP-PKD结合捕捉法可用于不同细胞源rAAV的快速纯化。     

基于树突状细胞的肿瘤疫苗研究进展

1973年,Steinman和Cohn在小鼠脾脏发现具有树枝状突起的独特形态细胞,并将之命名为树突状细胞（dendritic cell,DC）。DC作为连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁,是机体识别和摄取病原体和肿瘤抗原的关键细胞,具有抗原提呈能力强和激活初始型T细胞的特点。     

双歧杆菌三联活菌胶囊/散治疗新生儿黄疸临床疗效的Meta分析

摘要：目的 采用Meta分析方法评价双歧杆菌三联活菌胶囊/散治疗新生儿黄疸的临床疗效。方法 计算机检索中国知网、万方、维普、Pubmed、Embase、Web of Science数据库,检索时限均从建库至2015年12月,收集国内外应用双歧杆菌三联活菌胶囊/散治疗新生儿黄疸的所有随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）和前瞻性非随机对照试验（non-randomized controlled trial,non-RCT）,纳入文献时间从2001年1月至2014年12月不等。按照纳入与排除标准选择文献、提取资料并评价质量后,采用Cochrane协作网提供的RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果 检索文献无RCT研究,纳入17篇前瞻性non-RCT研究文献,合计1988例患者,其中治疗组（对照组常规治疗措施+双歧杆菌三联活菌胶囊/散）1 004例,对照组984例。Meta分析结果显示：治疗组的有效率优于对照组［OR=3.36,95%CI（2.14,5.27）,P<0.001］;治疗组新生儿黄疸持续天数低于对照组［Mean Deviation（MD）=-2.13,95%CI（-2.63,-1.62）,P<0.001］;治疗后第3天经皮胆红素值治疗组低于对照组［MD=-29.66,95%CI（-42.78,-16.54）,P<0.001］。结论 双歧杆菌三联活菌胶囊/散与常规治疗措施联用可以提高新生儿黄疸的总体疗效,同时可以有效减少新生儿黄疸的持续天数,加快黄疸的消退。