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目的改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。
方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以
±s表示并用两样本t检验进行比较。
结果经该方法培养的CD3- CD16+ 56+ NK细胞增殖倍数达到(4480.43±37.80)倍;CD3- CD16+ 56+ NK细胞纯度达到94.79%;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为(63.07±3.37)%和(54.85±2.04)%,分别高于对照组(16.28±2.86)%和(14.53±1.15)%(t = 62.25,22.66,P均< 0.01);细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为(111.39±6.95)?pg/ml和(32.76±3.23) pg/ml,分别高于对照组(44.99±4.74)pg/ml和(11.09±2.45)?pg/ml(t = 20.56,7.21,P均< 0.01);在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为(78.52±7.36)%,高于对照组(48.53±6.66)%(t = 11.56,P < 0.01);对H520细胞的杀伤效率为(65.03±3.27)%,高于对照组(35.85±3.99)%(t = 11.35,P < 0.01)。
结论利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。 相似文献
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