几种植物转基因表达载体的构建方法

表达载体的构建在植物基因工程研究中占据重要地位,直接关系到目的基因的表达效果。作者在收集整理前人的工作基础上,比较分析了5种不同载体构建方法的特点,给出了不同载体构建方法的适用性建议,期望能对植物基因工程中的载体构建工作提供有益帮助。在构建多片段连接的小载体的时候推荐用一步克隆法,在构建多片段连接的复杂的大载体时采用相应的复杂载体构建技术,在已获得无选择标记的转基因植株时采用三段T-DNA构建方法构建载体。在做基因功能验证时采用的Gateway技术,非常简单的载体构建可以采用传统的酶切连接的构建方式。现在的主流构建载体方式是利用结合其他手段的Gateway技术,未来载体的发展趋势将是无酶连接。     

芥蓝组织培养及再生体系的建立

以黄花芥蓝的子叶、子叶柄和带柄子叶为外植体,在不同的BAP和NAA浓度的组合诱导下,获得再生植株.研究结果表明,在测试激素浓度下,带柄子叶为外植体的再生率最一致,其最适BAP和NAA浓度分别为3.0mg/L和1.0mg/L;较低浓度的BAP和NAA有利于子叶再生,其最适BAP和NAA浓度分别为2.0mg/L和1.0mg/L;子叶柄只有在较高的BAP和NAA浓度下才能再生,但再生率依然很低.     

渗透胁迫下白花柽柳cDNA文库的构建及EST分析

目的：寻找渗透胁迫相关基因EST片断,方法：构建白花柽柳cDNA文库,对文库阳性克隆随机测序,并进行网上比对分析。结果：该cDNA文库克隆的重组率大于95%,插入片段主要集中在250～1000bp之间,并获得了如脯氨酸丰富蛋白基因,钙依赖蛋白激酶基因,丝氨酸／苏氨酸激酶基因,过氧化氢酶基因,膜转运蛋白等基因。结论：渗透胁迫基因是多基因参与的系统调控过程,它们涉及了植物细胞壁合成、信号传递、基因调控、氧化物质清除、渗透调节物质的转运等方面。