sRNA (istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的作用分析

sRNA(Small non-coding RNA,sRNA)为新近发现的基因表达调控分子,转录后水平调控靶基因表达,在细菌毒力、应激及对外界环境感应方面起调控作用。沙门氏菌是一种重要的人畜共患病病原菌,可引起人类食物中毒、败血症及伤寒等。以肠炎型沙门氏菌为模型,研究sRNA(istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的作用,为沙门氏菌的防治提供新方向。参考已报道的沙门氏菌全基因组及istR序列,设计引物,PCR扩增istR突变用基因片段,运用Red同源重组系统对肠炎沙门氏菌(SE2472)的istR基因进行定点敲除,构建敲除菌株(SE2472△istR),比较野生株和敲除株对活性氮氧的敏感性;构建回复表达质粒pHDB3-istR,将其转入istR敲除株构建回复株SE2472△istR-comp,以回复表达istR,分析istR表达对沙门氏菌istR敲除株抵抗活性氮氧的回复作用。活性氮抑菌结果表明,SE2472在pH 5.0、NaNO2浓度为20 mmol/L的LB液体培养基中培养3 h,存活率为20.40%;培养6 h,存活率降至0.05%。同等培养条件下,SE2472△istR的存活率分别为0.70%和0,SE2472△istR-comp生长情况与SE2472类似,存活率分别为21.40%和0.08%。同时用H2O2分析istR在沙门氏菌抗活性氧中的作用,活性氧抑菌结果表明,SE2472和SE2472△istR两者对H2O2的抑菌作用无明显差异。综合上述结果,推测istR在沙门氏菌抗活性氮中起着调控作用,在抗活性氧作用中没有调控作用。     

非编码小RNA(sraB)调控肠炎型沙门菌的抗蛋清抑菌作用

【目的】肠炎型沙门菌是一种食源性人畜共患病病原菌,可在禽蛋中存活并传播。sRNA为新近发现的基因表达调控分子,本实验以sRNA(sraB)为对象,探索sRNA与肠炎型沙门菌在禽蛋中存活的相关性,及研究其在细菌抵抗蛋清抑菌作用中的调控功能。【方法】参考已报道的沙门菌全基因组及sraB序列,设计并扩增sraB突变用基因片段,运用Red重组系统(red recombination system)对肠炎沙门菌野生株(SE2472)sraB基因进行定点敲除,构建出sraB敲除株(SE2472ΔsraB)。分析比较sraB敲除对沙门菌在蛋清中存活的影响;另构建表达sraB的回复表达质粒pHDB3-sraB,将其转入sraB敲除株构建回复株SE2472ΔsraB-comp,以回复表达sraB,分析sraB表达对沙门菌敲除株的回复作用;并分别以野生株、敲除株及回复株研究sraB在抵抗蛋清中几种抑菌因子(如溶菌酶和卵转铁蛋白)作用中可能的调控作用。【结果】敲除株在蛋清中存活率为野生型的61%-70%,回复株相比野生型的存活率比敲除株提高10%-33%;在转铁蛋白抑菌实验中,孵育8h和24h,敲除株的存活率分别为野生型存活率的38%和23%,孵育8h回复株相比野生型的存活率比敲除株提高15%,但孵育24h回复株的存活率未见提高;在溶菌酶抑菌实验中,孵育8h和24h后,敲除株存活率分别为野生型的41%和27%,回复株相比野生型的存活率分别比敲除株提高35%和23%。【结论】通过比较sraB敲除与否,研究肠炎型沙门菌在禽蛋中的存活及对抑菌因子的抵抗作用,结果表明sraB在肠炎沙门菌抵抗蛋清抑菌作用中起着重要调控功能。