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固定化PNP酶柱反应器在pH9,37℃,含有6微克分子/毫升MgCl_2,0.04%NaN_3,11~12微克分子/毫升CDP(IDP)的条件下,连续聚合反应1.5~2个月,转化率基本不变。所得的Poly I,Poly C用Lowry法测不出蛋白,紫外吸收光谱符合标准。按人体用量放大350~400倍进行急性动物毒性试验证明无毒害作用。可以省去自然酶制备Poly I,Poly C过程中酚脱蛋白的工艺。 相似文献
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黑曲霉糖化酶高产和低产菌株糖化酶基因调控区的克隆及其分析比较 总被引:7,自引:1,他引:7
以PCR合成的糖化酶高产菌株黑曲霉(Asp. Niger)T21糖化酶基因5’近端非编码区588bp(EcoRI-BamHI)的序列为探针,从T21染色体DNA中克隆到近2.0kb的糖化酶基因5’端非编码区序列,并以此序列为探针从糖化酶低产菌株黑曲霉3.795(T21的诱变出发株)的染色体DNA中克隆到1.5kb的糖化酶基因5’端非编码区序列。该二序列的分析测定结果表明,其结构特征与文献报道的黑曲霉糖化酶基因5’端非编码区的基本一致,被称为“核心启动子”(Core promoter)的TATAAAT框及GCAAT框,分别在翻译起始点的-109bp及-178bp处。此外,在曲霉amdS,amyB基因中已发现有调控功能的CCAAT序列存在于-449bp和-799bp处。高产和低产菌株糖化酶基因5’端非编码区序列的分析比较结果表明,有9个部位的碱基发生了变化。此实验结果为进一步研究黑曲霉糖化酶基因在转录水平上的调控规律打下了基础。 相似文献
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天花粉蛋白与FMP复合物的晶体结构 总被引:5,自引:1,他引:5
用浸泡法得到了天花粉蛋白(TCS)与FMP复合物的晶体,在SIMENNSX-200B面探测器系统上收集了一套2.0分辨率的X射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了复合物的结构,经X—PLOR程序修正得到了TCS—FMP复合物的分子结构并找出了197个水分子,最后的R因子为0.172,键长和键角的RMS偏差分别为0.015和2.922度。TCS—FMP复合物中,FMP与天花粉蛋白分子有较好的结合,其结合位置正处于根据三维结构和突变体信息推测的N一糖苷酶活性口袋之中。它的类嘌呤环夹在Y70和Y111两个侧链环之间,与Y70环近乎平行,其N7和N6分别与TCS分子的G1094羰基氧和I71的N成氢键,N3靠近R163的侧链,其磷酸根则伸向活性口袋的底部,与E189、E160和R163等残基作用。 相似文献
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黑曲霉T21是由黑曲霉3.795经诱变育种获得的糖化酶高产菌株,为阐明其高产的分子机制,由黑曲霉3.795克隆了糖化酶结构基因及其5′旁侧序列,并与黑曲霉T21的相应序列进行了比较.由黑曲霉3.795菌丝体分离染色体DNA,Southern杂交分析表明,糖化酶结构基因位于~2.5kb的EcoRⅠ-EcoRⅤ染色体DNA片段上,在此EcoRⅠ位点上游约1.0kb处有一SalⅠ位点.为构建糖化酶结构基因及其5′旁侧序列的基因组文库,该染色体DNA分别用EcoRⅠ+EcoRⅤ和EcoR+SalⅠ消化,琼脂糖凝胶电泳分离并回收长度在1.0kb左右和2.5kb左右的DNA片段,分别与pUC19载体连接后转化入E.coliDH5.用原位杂交方法筛选到了携带糖化酶基因编码区及其1505bp5′旁侧序列的阳性克隆.对克隆片段的DNA序列进行了测定并与黑曲霉T21的相应序列进行了比较,结果表明,在糖化酶基因编码区及其150bp3′非编码区内,未发现碱基差异,但在-340~-1505的5′上游区内发生了9个位置的碱基变化,包括缺失、插入和替换.这些结果表明,黑曲霉T21与3.795的糖化酶产量的差异与其结构基因无关,但可能与其 相似文献
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Trichosanthin(TCS)isanimportantmemberofribosomeinactivatingproteins[1].ItpossessesNglycosidaseactivityremovingadenine(ADE)atpositionA4324of28SrRNA[2].TheactivepocketofNglycosidasehasbeenestablishedthroughthecrystalstructuresofTCS,αMMCandricinandassayofmutants… 相似文献
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介绍一种新的非同位素测定2′,5′-寡聚腺苷酸合成酶(2′,5′-OASE)活性的方法.反应液经已糖激酶处理,点样于PEI-纤维素薄层层析板上,经甲醇浸泡与预层析和在0.75mol/LKH2PO4(pH3.5)缓冲液中的层析可使ADP和2′,5′-An分离开,系统偏差和2′,5′-OASE测活分析表明,本方法可用于粗酶液及部分纯化酶液的2′,5′-OASE活性测定,并可用于临床生化分析 相似文献
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培养了(E160A,E189A)TCS(天花粉蛋白)的单晶。用浸泡法得到了(E160A,E189A)TCS与Ade复合物的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了均为0.20nm分辨率的X射线衍射数据,数据处理用MarScale程序系统完成。用同晶差值Fourier法解析了(E160A,E189A)TCS和(E160A,E189A)TCS-Ade的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序.修正结果,晶体学R因子分别为0.180、0.184,键长和键角的RMS偏差分别为0.0012nm和2.566°、0.0012nm和2.622°。在(E160A,E189A)TCS-Ade中,Ade仍结合在N-糖苷酶活性口袋之中,它夹在Tyr70和Tyr111两个侧链环之间,与Tyr70环近乎平行。这一结果表明:TCS中的Glu160和Glu189同时突变成Ala,仍能与AMP发生N-糖苷酶反应.前文已经证明在(E160A)TCS中Glu189没有援救作用。目前,没有发现Glu189对TCS与AMP的直接作用,但Glu189与其它残基的协同作用及其在TCS与rRNA作用中扮演什么角色,尚待进一步研究。 相似文献
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天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)的一个亚型,neoTrichosanthin(n-TCS),及其突变体Y70An-TCS被克隆和表达为重组蛋白。用悬滴汽相扩散法得到n-TCS和Y70An-TCS的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了0.20nm和0.205nm分辨率的X射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了结构。最后晶体学R因子分别为0.183和0.184。键长的 相似文献
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淀粉样蛋白的沉积与Tau蛋白磷酸化是阿尔茨海默病发病的关键分子机制,神经元胞内钙离子的变化可影响其生成和代谢;另一方面,这些蛋白的改变会进一步导致神经元钙稳态的失调,致使突触损伤、神经细胞凋亡及认知功能下降.本文就神经元钙稳态失衡在阿尔茨海默病发病中的进展进行综述. 相似文献