固定化赭曲霉NG0216细胞羟基化坎利酮

初步研究赭曲霉NG0 2 16固定化细胞的催化转化坎利酮11α羟基化的条件。实验表明优化的固定化方法为:4 %的海藻酸钠包埋15 %的湿菌体,在4 %的氯化钙溶液中固化1h。催化转化条件为:8g/L坎利酮,pH 6 0 ,2 8℃。连续转化3批,每批的转化率均超过85 %。转化获得的羟基化坎利酮粗品经乙酸乙酯提取分离,三次重结晶后,采用质谱、核磁共振、元素分析等手段对羟基化坎利酮进行结构表征。鉴定结果表明,得到结晶的羟基化坎利酮含量为99 7% ,结晶呈浅黄色针状,其表面光滑;结构表征结果确认所制备的物质为11α羟基化坎利酮,其熔点为2 4 0℃,在乙酸乙酯中的比旋光度为 12 8°。     

葡枝根霉NG0305酶催化甾体C11α-羟基化的研究

应用本实验室保藏的葡枝根霉Rhizopus stolonifer NG0305对甾体化合物烯睾丙内酯(3-oxo-4,6-diene-Pregna-17-aloha-hydroxy-21-carboxylic acid gama-lactone)进行酶催化C11α-羟基化反应的研究。研究结果表明,菌体培养的碳源供应对菌体所产羟化酶的活力有重要影响。采用葡萄糖和淀粉组合碳源,并加入适量的黑曲霉糖化酶的方式,解决了葡萄糖抑制的问题,并缩短了菌体培养反应时间,得到高羟化转化率。酶转化反应88h后,提取吸附在菌丝球内的产物,应用液相色谱测定,结果表明C11α-羟基化转化率达到了53．0％。