乳杆菌bsh基因的高效表达及高活性酶蛋白获得

目的探讨乳杆菌bsh基因的高效表达及胆盐水解酶(BSH)的高活性酶蛋白获得。方法从本实验室保存的12株乳杆菌菌株中,通过Ca²⁺沉淀法初筛获得具BSH活性的菌株,根据GenBank上公布的16S rRNA同源性最高的乳杆菌的BSH全基因序列,设计特异性引物,PCR扩增获得bsh基因并克隆至表达载体pET28α,构建BL21pET28αbsh原核表达体系。经IPTG诱导后,对表达产物进行SDSPAGE分析及Western blot验证。结果研究表明在分子质量大小约35、37 kD处有预期条带出现,初步表明BSH蛋白表达成功。进而对表达各条件进行优化,最佳酶活条件为IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导pH 6.5、诱导温度37 ℃、诱导时间1 h。经镍柱亲和层析纯化制备BSH制剂,邻苯三酚红钼法蛋白浓度测定为1 446 mg/dL,茚三酮法测酶活性最高可达21 248.27 U/(g·prot),为纯化前的635.4倍。结论乳杆菌bsh基因可溶性表达成功且高酶活BSH纯化获取为进一步的研究和药物转化奠定基础。     

共生病毒组的组成及其功能

共生病毒广泛参与机体各项生理和病理过程，近年来受到高度关注。共生病毒在自身免疫性疾病、变应性疾病、肿瘤发生、抗病毒免疫反应及炎症性疾病的发生、发展过程中发挥重要作用，其可通过调控免疫细胞的分化发育和功能行使，尤其是细胞因子的分泌进而参与其中。由于二代测序技术的发展，宏基因组学研究技术进展迅速，共生病毒与疾病进展的研究进一步加深了人们对共生病毒功能的理解。由于共生病毒在机体的分布、宿主遗传背景以及共生微生物的不同，共生病毒可能诱导机体产生多种有益或不利的免疫反应。本文简要阐述了共生病毒在机体的分布、组成和作用机制，及其在疾病诊断和治疗中的潜在意义，并对共生病毒未来在疾病诊疗中的潜在应用前景做一展望。