高亲和力莱克多巴胺单克隆抗体的研制及ciELISA检测方法的建立

  用混合酸酐法（MA）将莱克多巴胺（RAC）偶联于牛血清白蛋白（BSA）,合成人工抗原BSA-RAC,用UV和SDS-PAGE鉴定;用BSARAC免疫Balb/c小鼠,细胞融合技术建立高亲和力RAC单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb;应用RAC mAb研制RAC残留快速检测ciELISA试剂盒（RAC-Kit）,并测定其性能。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为24.5∶1;筛选出3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株亲和常数（Ka）为1.65×1010L/mol; RAC-Kit的检测限为0.5ng/ml,检测范围为0.5～151ng/ml,饲料样、猪尿样的平均添加回收率为87.2%,89.4%,平均批内和批间变异系数小于15%,与多巴酚丁胺的交叉反应率（CR%）为9.7%,与其它化合物无CR,RAC-Kit在4 ℃保存期为180d。     

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立

重氮化法将克伦特罗（CL）偶联于BSA合成免疫抗原BSA-CL,戊二醛法（GA）合成包被抗原OVA-CL,用BSA-CL免疫Balb／C小鼠。细胞融合技术建立高亲和力CL单克隆抗体（CL mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CL mAb,并测定其亲和性。依据胶体金免疫层析试验（GICA）原理,应用CL mAb研制CL残留快速检测免疫试纸（CL-Srip）,并测定其性能。结果表明,筛选出16株杂交瘤细胞,其中亲和力最高的为3C12—6H6,亲和常数（Ka）为1．76×10^10L／mol。CL-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0．5μg／L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒和GC／MS相当,符合率为100％。CL-Strip具有具有敏感、特异、快速、简便的特点,可推广应用于CL残留的快速检测。     

19-去甲睾酮异源性ciELISA试剂盒的研制及应用

筛选抗19-去甲睾酮（NT）单克隆抗体,建立异源性ciELISA试剂盒。用人工抗原NT-17-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立1株抗NT单克隆杂交留细胞NT1-B7,同种型为IgG1 /k,腹水效价达0.64×105,亲和常数（Ka）为4.31×109 L/mol,半数抑制浓度（IC50）为0.55 ng/mL,与群勃龙和雌二醇的交叉反应率（CR）分别为2.2%和1.6%,与其它化合物无CR。异源性ciELISA试剂盒在猪肉、猪尿、牛肉和牛尿四种基质中的检测限分别为0.24、0.23、0.22和0.17 ng/mL,批内和批间相对标准差（RSD）在4.4％～21.8％,添加回收率在85％～110％,4 ℃下保存期至少6个月。NT-Kit的基质pH值适用范围为6.5～7.5,温育过程优化后可节约检测时间30～90 min。试剂盒灵敏度高、特异性强,可应用于样品基质中NT残留检测。