7种茵陈单体化合物对黄疸大鼠血清培养的hiHep细胞中水通道蛋白8表达的影响

摘要 目的：探究具有保肝利胆作用的7种茵陈单体化合物（6,7-二甲氧基香豆素、对羟基苯乙酮、绿原酸、咖啡酸、茵陈色原酮、东莨菪内酯和茵陈黄酮）对黄疸大鼠血清培养的hiHep细胞中水通道蛋白8（AQP8）表达的影响。方法：将SD大鼠分为正常组和模型组,通过?琢-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导构建黄疸大鼠模型。检测两组大鼠血清中碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）水平。将人源诱导型肝样细胞（hiHep）随机分为9组：对照组、黄疸血清组（JS组）、黄疸血清+6,7-二甲氧基香豆素组（JS+DME组）、黄疸血清+对羟基苯乙酮组（JS+4-HYD组）、黄疸血清+绿原酸组（JS+CHA组）、黄疸血清+咖啡酸组（JS+CAA组）、黄疸血清+茵陈色原酮组（JS+CAP组）、黄疸血清+东莨菪内酯组（JS+SCO组）和黄疸血清+茵陈黄酮组（JS+ARC组）。对照组细胞使用含10%正常大鼠血清的培养基培养,其他组细胞均使用含10%黄疸大鼠血清的培养基培养。对照组和JS组细胞不做药物处理,其他组细胞均分别使用20 mg/L的相应药物培养48 h。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活力。检测各组细胞的蛋白质渗透压反射系数σ。通过qRT-PCR检测细胞中AQP8的mRNA水平,通过Western blot检测细胞中AQP8、环磷酸腺苷（cAMP）和蛋白激酶A（PKA）的蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组大鼠血清中ALP、ALT、AST和TBIL水平均显著升高（P<0.05）。各组细胞活力差异无统计学意义（F=1.085,P=0.391）。与对照组比较,JS组细胞的σ值降低（P<0.05）,与JS组比较,JS+DME组、JS+4-HYD组、JS+CHA组、JS+CAA组、JS+CAP组、JS+SCO组和JS+ARC组细胞的σ值均升高（P<0.05）。与对照组比较,JS组细胞AQP8的mRNA和蛋白相对表达量降低（P<0.05）,cAMP和PKA的蛋白相对表达量降低（P<0.05）。与JS组比较,JS+DME组、JS+4-HYD组、JS+CHA组和JS+CAP组细胞AQP8的mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）,cAMP和PKA的蛋白相对表达量升高（P<0.05）。JS组与JS+CAA组、JS+SCO组和JS+ARC组细胞AQP8的mRNA和蛋白相对表达量以及cAMP和PKA的蛋白相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）。结论：本研究表明6,7-二甲氧基香豆素、对羟基苯乙酮、绿原酸和茵陈色原酮可上调黄疸大鼠血清培养的hiHep细胞中AQP8的表达,这可能是茵陈治疗黄疸的机制之一。