人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab’融合蛋白的构建和表达

研究共刺激分子4-1BBL在肿瘤靶向治疗方面的作用, 用PCR 和overlap PCR 方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab’融合蛋白表达载体, 并用双脱氧终止法测定DNA 序列; 采用亲和层析法纯化该产物, 并用SDS-PAGE和HPLC鉴定纯化产物; 采用玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。DNA 序列测定结果表明: 人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab’融合蛋白已构建成功。表达可溶性产物的产量达200 mg/L以上, 纯度较高, 具有与激活的Jurkat (4-1BBL+) 和Raji细胞(CD20+)结合的活性。这将为非何杰金氏淋巴瘤免疫治疗、靶向治疗提供新的思路。     

人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab’融合蛋白的构建和表达

研究共刺激分子4-1BBL在肿瘤靶向治疗方面的作用, 用PCR 和overlap PCR 方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab’融合蛋白表达载体, 并用双脱氧终止法测定DNA 序列; 采用亲和层析法纯化该产物, 并用SDS-PAGE和HPLC鉴定纯化产物; 采用玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。DNA 序列测定结果表明: 人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab’融合蛋白已构建成功。表达可溶性产物的产量达200 mg/L以上, 纯度较高, 具有与激活的Jurkat (4-1BBL+) 和Raji细胞(CD20+)结合的活性。这将为非何杰金氏淋巴瘤免疫治疗、靶向治疗提供新的思路。     

云南省昭通市婴幼儿急性胃肠炎中轮状病毒的研究

本文报道应用PACE、EM、ELISA检测技术,对1982年10月到1985年12月间采自云南省昭通市的婴幼儿急性胃肠炎患者大便标本中的A组轮状病毒(RV)和腺病毒(Adv)的研究结果。从309例标本中共检出169例含有RV,阳性率为54.7％。在不同性别间RV检出率没有显著差异。RV>6月～24月龄患儿组中的检出率(59.1％)显著高于(?)6月龄患儿组(33.3％)(P<0.01)。10月至1月是PV胃肠炎流行的高峰季节,在这一季节中RV的检出率(65.1％)显著高于其它季节(P<0.001)。对RV基因RNA的分子流行病学研究发现,1984年2月至1985年12月间在昭通市流行的RV全为第二亚组。Adv在婴幼儿急性胃肠炎中的检出率为16.7％。结果表明,RV是昭通市婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体,它的流行具有明显的季节性。     

二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重叠PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,进行原核表达。表达产物经阳离子层析柱和抗Etag亲和层析柱分离纯化,还原性和非还原性SDS-PAGE电泳鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FCM)检测生物学活性。将改造前后的两种抗体分别置37oC含0.2%人血清白蛋白(Human serum albumin,HAS)的PBS中孵育,取多个时间点比较两者与两种把抗原的结合能力。基因重组质粒经测序证实序列正确。向抗Pgp轻重链引入突变的diabody(dsPgp-diabody)在原核表达系统中,SDS-PAGE显示纯化后的蛋白二硫键不能配对。而向抗CD3轻重链引入突变的diabody(dsCD3-diabody)能够在原核表达系统中进行可溶性表达,二硫键能够正确配对。并且与改造前的diabody相比,dsCD3-diabody的抗原结合特异性...     

人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab'融合蛋白的构建和表达

研究共刺激分子4-1BBL在肿瘤靶向治疗方面的作用,用PCR和overlap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab'融合蛋白表达载体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用SDS-PAGE和HPLC鉴定纯化产物;采用玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性.DNA序列测定结果表明:人4-1BBL胞外区/抗CD20 Fab'融合蛋白已构建成功.表达可溶性产物的产量达200 μg/L以上,纯度较高.具有与激活的Jurkat(4-1BBL )和Raji细胞(CD20 )结合的活性.这将为非何杰金氏淋巴瘤免疫治疗、靶向治疗提供新的思路.