蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2基因的克隆

从蝮蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ．利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以ｃＤＮＡ为模板进行体外扩增,获得磷脂酶Ａ２（简称ＰＬＡ２）基因,克隆至ｐＢＳ－ｋｓ载体中。通过对３个碱性ＰＬＡ２（简称ＢＰＬＡ２）基因单独克隆分别作ＤＮＡ全序列分析,推导ｐｒｏ－ＢＰＬＡ２由１３８个氨基酸残基构成,与已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。该基因成功的克隆,不仅推导出ＢＰＬＡ２的蛋白质全序列,也为进一步开展蛇毒功能肽蛋白质工程的研究工作打下了良好的基础。     

中国稻属植物叶片亚显微结构比较研究

用扫描电镜对原产中国的3种野生稻和2个栽培稻品种的叶片表面亚显微结构,尤其是气孔列数、气孔频度、气孔器乳突、大瘤状乳突、小栓细胞乳突等进行比较研究。结果显示,气孔频度的变化趋势是沿着疣粒野生稻-药用野生稻-栽培稻IR36-簿通野生稻-栽培稻珍汕97逐渐增大,其变化幅度在635-1737个／mm^2之间;气孔器乳突除疣粒野生稻为6个外,其余通常为4个;疣粒野生稻既无大瘤状乳突亦无木栓细胞乳突．药用野生稻无木栓细胞乳突。这些性状不仅具什种的特异性,而且与亲缘关系远近有关,可以作为稻属分类的依据。     

基因芯片技术检测拉美夫定相关的HBV变异

In order to study the feasibility of gene chips technology in the detection of HBV mutation associated with lamivudine, we detected the mutation of HBV in peripheral blood of 30 patients treated with lamivudine for at least half a year by gene chips. The result was compared with that from direct sequencing. Both results are highly coincident. The rate reaches 100% while detecting single strain of virus infection, and 85% in multi-strains virus infection. Gene chip technology is quite valuable and practical in future clinic.     

表达K1-5 蛋白的人胎盘间充质干细胞抑制大鼠主动脉环血管生成的实验研究

目的:观察表达外源性Kringle1-5(K1-5)蛋白的人胎盘组织的间充质干细胞(HPMSCs)在体外对大鼠主动脉环血管生成的影响。方法:用胶原酶和贴壁法从人胎盘组织中提取间充质干细胞。选取感染复数MOI:50,将重组腺病毒载体rAd-K1-5感染HPMSCs至48 h;应用荧光显微镜观察转染效率。取8周雌性SD大鼠的腹主动脉,建立主动脉环血管生成体外模型,6天后观察基质胶内微血管形成的情况。结果:从人胎盘组织提取的成纤维样细胞具有贴壁生长特性,可向成骨细胞、脂肪细胞分化,证明从胎盘提取的细胞是间充质干细胞。采用rAd-K1-5腺病毒载体感染的HPMSCs可分泌Kringle1-5蛋白,表达K1-5蛋白的转基因HPMSCs处理的基质胶栓中管样结构的形成明显减少。结论:表达外源性Kringle1-5蛋白的HPMSCs能够体外抑制大鼠主动脉环新生血管生成。     

硝酸银对雌性黄瓜植株三种氧化酶同工酶的影响

雌性黄瓜植株经硝酸银处理后其茎尖和真叶过氧化物酶活性极显著地增加,茎尖24小时、真叶36小时酶活性达到最大值,分别增加了178.2%和284.6%,随后酶活性逐渐下降,但酶活性仍然较对照植株高。多酚氧化酶和超氧化物歧化酶的同工酶活性也增加。同时硝酸银能诱发黄瓜植株过氧化物酶、多酚氧化酶和超氧化物歧化酶产生新的同工酶, 用等电聚焦更能有效地观察新产生的同工酶。     

长期中小强度有氧运动对大鼠左心室肌蛋白质组差异表达的影响*

目的:探讨长期中小强度有氧运动对大鼠左室肌蛋白质组差异性表达的影响,筛选出对中小强度有氧运动刺激敏感的目标蛋白质,丰富运动健身的基础理论及为慢性心血管疾病的康复治疗提供新的思路和实验依据。方法:20只雄性SD大鼠随机分为运动组(E组)和对照组(C组)(n=10)。建立大鼠长期中小强度有氧运动跑台训练模型,采用双向凝胶电泳(2-DE)对大鼠左心室肌全蛋白样品进行分离。采用串联飞行时间质谱蛋白质仪对部分分离后差异表达量上调大于5倍或下调超过80%的蛋白质点进行质谱鉴定。结果:与C组比较,E组大鼠心脏重量指数(HWI)增加了32.0%,具有显著性差异(P＜0.05);与C组比较,E组有71个蛋白质点表达上调≥2倍或下调≥50%,对4个表达上调≥5倍或下调大于等于80%的蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出3个蛋白质和1个未知蛋白质。结论:长期中小强度有氧运动后,大鼠心脏发生了良好的适应性改变;大鼠左心室肌蛋白质组发生了明显变化,长期中小强度有氧运动能有效增强大鼠心肌抗氧化能力。     

RP-HPLC 法测定酸枣仁汤中甘草苷的含量

目的:建立测定酸枣仁汤中甘草苷含量的反相高效液相色谱分析方法。方法:色谱柱:WatersC18(250nm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0ml/min,检测波长:276nm。结果:芒果苷在0.093μg-0.744μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为98.04%,RSD为0.41%。结论:本方法简便、准确、可靠、重复性好,可作为酸枣仁汤中甘草苷的含量测定方法。     

不同首剂匹罗卡品制作颞叶癫痫大鼠模型的研究

目的:研究不同首次剂量匹罗卡品对氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型诱发成功率、死亡率的影响。方法:90只SD大鼠随机分为三组,每组首次使用匹罗卡品剂量:A组10mg/kg、B组20mg/kg、C组30mg/kg;随后采用多次注射10mg/kg匹罗卡品,比较3组癫痫持续状态诱发成功率、死亡率的差异。结果:A、B、C组癫痫持续状态诱发成功率分别为66.7%、90%、93.3%。其中A组与B组之间诱发成功率差异有统计学意义,P<0.05;C组与B组之间相比,差异无统计学意义,P>0.05。三组死亡率分别为20%、23.3%、57.1%,其中A组与B组之间差异无统计学差异,P>0.05,;C组与其它两组相比较差异有统计学差异,P<0.05。结论:首次剂量20mg匹罗卡品,然后10mg多次反复注射,癫痫持续状态诱发成功率高、死亡率低,是一种理想的颞叶癫痫模型。     

大赖草及近缘物种原位杂交和Southern杂交的分析

用Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍｂｅｓａｒａｂｉｃｕｍ（Ｓａｖｕｌ．＆Ｒａｙｓ）Ａ．Ｌｖｅ的基因组ＤＮＡ作探针,分别与大赖草Ｌｅｙｍｕｓｒａｃｅｍｏｓｕｓ（Ｌａｍ．）Ｔｚｖｅｌ．和脆轴偃麦草Ｔｈ．ｊｕｎｃｅｕｍ（Ｓａｖｕｌ．＆Ｒａｙｓ）Ａ．Ｌｖｅ的体细胞杂交,大赖草的１４对染色体均出现杂交信号,脆轴偃麦草只有７对染色体有杂交信号。在用重复ＤＮＡ序列ＰＨｖ６２作探针的原位杂交中,Ｔｈ．ｂｅｓａｒａｂｉｃｕｍ有４对染色体有杂交信号,大赖草有１３对染色体显示杂交信号,新麦草Ｐｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｎｅｖｓｋｉ和脆轴偃麦草无杂交信号。用ＰＨｖ６２作探针的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果与原位杂交相似。在被检测的１２个普通小麦大赖草异源染色体系中,除二体附加系中５Ｌｒ＃１和双二体附加系１Ｌｒ＃１＋５Ｌｒ＃１没有杂交信号外,其余的异染色体系与ＰＨｖ６２都有特异杂交信号。据此推测Ｔｈ．ｂｅｓａｒａｂｉｃｕｍ有可能参予了赖草属物种的形成过程。但是,大赖草的染色体组在进化过程中显然已发生过变异。     

小麦黄花叶病毒基因组核苷酸序列分析*1)

以小麦黄花叶病毒(WYMV)HC分离物为材料,合成病毒基因组cDNA并进行序列分析.结果表明,病毒RNA1共有7 629个核苷酸,编码1种由2 407个氨基酸组成的多聚蛋白,切割产生病毒外壳和其他7种可能的蛋白质.该病毒的RNA2共有3 639个核苷酸,编码1种由903个氨基酸组成的蛋白,可能切割产生2种非结构蛋白.WYMV虽然与小麦梭条花叶病毒(WSSMV)在基因组结构上具有相似性,但是两者间在核苷酸及氨基酸水平上的同源性却分别低于70%和75%.由此结果可以确认,WYMV与WSSMV是大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)的2种不同病毒.