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慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染引起的原发性肝癌涉及多种基因、转录本和蛋白质的相互作用及调控。从单个基因的角度来看,某个基因的表达量的改变只能对肝癌发生发展的局部作出解释而无法从整体行为进行深入和全面的探索,无法满足高度复杂性的调控研究需要。筛选乙肝相关性肝癌的基因芯片数据获取差异表达基因后,应用加权基因共表达网络分析算法构建基因共表达网络,识别与肝癌发生相关的模块,利用可视化筛选枢纽基因,并针对枢纽基因进行基因本体富集分析和初步验证。富集分析和文献挖掘一致发现,某些枢纽基因确实与多种癌症的发生与发展存在显著的关联。权重基因共表达网络分析方法被证明是一个高效的系统生物学方法,应用该方法发现了新的HBV相关性肝癌枢纽基因。经实验验证,发现枢纽基因SHARPIN促进细胞迁移。该研究对肝癌发生的调控机制以及发现HBV慢性感染导致肝癌的新型诊断标志物和(或)药物作用靶点提供了新的视野。 相似文献
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通过构建鸭乙肝病毒ε(Dε)的RNA文库并利用指数级富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选的策略,获得与反转录酶(P蛋白)高度亲和的适配子(Aptamer),再通过体外引发实验和核酸酶切割方法测定全部适配子的RNA二级结构,以研究鸭乙型肝炎病毒(Duck Hepatitis B Virus,DHBV)中对启动P蛋白引发步骤至关重要的ε结构信息。本研究发现凡是支持P蛋白启动引发的高亲和力适配子中均包含完整的侧向突出结构;而一旦侧向突出被破坏,则适配子均不再支持P蛋白启动引发。本研究的结果表明Dε分子内部的一个完整侧向突出结构对于P蛋白启动引发是必不可少的。 相似文献
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人生长激素释放因子基因的合成和克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道人生长激素释放因子(Leu27,Met44)hGRF(1-44)基因的合成和克隆。选用大肠杆菌高效表达所偏爱的简并密码子,用计算机辅助设计合成基因的顺序,用固相亚磷酸酰胺法合成了hGRF的6个寡聚核苷酸片段,长度分别为39至51个桉苷酸,总共141个碱基对。通过酶促连接反应构建完整的hGRF基因,并直接克隆到pUC-19质粒中,克隆的宿主菌为E.Coll JM83。通过抗性筛选、阳性标记筛选、限制酶分析和分子杂交确定阳性克隆株。用M13双脱氧末端终止法对克隆基因序列分析,证实台成和克隆的hGRF基因序列完全正确。 相似文献
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经柑桔裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,简称CEV)感染后的指示植物爪哇三七(Cynura aurantiaca),分别施用不同浓度的赤霉素(5ppm,10ppm,50ppm,100ppm,200ppm)、萘(100ppm,300ppm)、5-氟尿嘧啶(0.5mg/L,1mg/L,2mg/L)溶液,其相对感染指数(Relative infectivity index)均有程度不同的改变。抽提叶片核酸,经5%双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-银染色法结合凝胶扫描技术确定CEV浓度,辅以点杂交方法定性,观察到施用赤霉素组CEV浓度增高,施用萘组和5-氟尿嘧啶组CEV浓度均降低。用无性繁殖的柑桔苗作材料,CEV感染后分别施用50ppm赤霉素、300ppm萘、1mg/L 5-氟尿嘧啶溶液,用相同的分析方法,得到了与爪哇三七一致的结果。讨论了这三种药物影响CEV复制的意义。 相似文献
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通过硅胶、ODS、Sephadex LH-20等多种柱色谱技术以及制备HPLC等对黄鹌菜(Youngia japonica)甲醇提取物进行分离,根据核磁波谱技术对分离的化合物进行结构鉴定。利用MTT法筛选影响三阴性乳腺癌(MDA-MB-231)细胞生长的化合物,进一步利用克隆形成实验,Hoechst33342/PI双染色法,Annexin V-FITC/PI双染以及Western blot检测候选化合物对乳腺癌和结直肠癌的抑制效果及可能的作用机制。从黄鹌菜中分离到5个单体化合物,经核磁共振谱鉴定为grosheimin (1),4-(3′-hydroxypropyl)-2,6-dimethoxyphnol-3′-O-β-D-glcoside (2),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(4),芹菜素(5)。通过活性筛选发现grosheimin能显著降低三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的活力。明视野下观察到在不同浓度grosheimin处理下,MDA-MB-231和结直肠癌(HCT-116)细胞形态发生明显改变;grosheimin作用24 ... 相似文献
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近年来多种冠状病毒感染后引发患者严重的呼吸道疾病,造成危害人类健康的严重公共卫生事件。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)暴发以来,大量研究使得人们对冠状病毒与宿主相互作用机制有更多的了解,其中关于病毒感染后应激颗粒的形成和抗病毒作用也做了大量研究。病毒的RNA和蛋白可以激活宿主细胞内蛋白激酶R(Protein kinase R,PKR)及其下游信号,刺激应激颗粒(Stress granules,SGs)的形成,进而降低病毒在宿主细胞内所需蛋白的翻译水平,抑制病毒复制。然而冠状病毒与宿主长期博弈过程中也衍生出对抗细胞SGs的相应机制,比如利用蛋白与SGs相互作用,来抑制SGs的形成和解聚,逃逸细胞对病毒的抑制作用,保证病毒稳定复制,其中新型冠状病毒就是典型的例子。因此SGs的诱导为抗冠状病毒可能提供一个新型治疗策略。本文对冠状病毒感染抵抗细胞应激颗粒的形成促进其解聚的分子机制进行综述。 相似文献
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摘要 目的:研究半乳糖凝集素-3结合蛋白(LGALS3BP)在IFN-?酌介导的抗HBV中的作用。方法:采用qRT-PCR及Western Blot分别检测HepG2细胞瞬转过表达质粒及干扰质粒后LGALS3BP转录水平和翻译水平的变化及检测IFN-γ对HepG2细胞内源性LGALS3BP转录水平和翻译水平的影响;采用CCK-8评价LGALS3BP表达量的变化对HepG2细胞增殖的影响及确定IFN-γ处理HepG2和HepG2.215的最适浓度;采用ELISA检测当LGALSEBP表达量发生变化时,IFN-γ刺激后对细胞外分泌的HBsAg和HBeAg的影响;采用q-PCR和RT-PCR分别检测细胞内HBV核衣壳中DNA和细胞内HBV RNA水平。结果:40 ng/mL的IFN-γ处理HepG2细胞48小时,LGALS3BP mRNA表达量与对照组相比提高2.87倍,但LGALS3BP表达量的变化对细胞增殖无显著作用;当过表达LGALS3BP时,在IFN-γ介导的抗HBV过程中,与对照组相比,HepG2.215细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对下降幅度分别为46%、67%、59%、49%;与对照组相比,转染pCH9-3091的HepG2细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对下降幅度分别为67%、53%、60%、29%;而当干扰LGALS3BP时,在IFN-γ介导的抗HBV过程中,与对照组相比,HepG2.215细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对上升幅度分别为46%、67%、59%、49%;与对照组相比,转染pCH9-3091的HepG2细胞分泌的HBsAg、HBeAg以及细胞内HBV DNA和RNA的相对上升幅度分别为67%、77%、67%、45%。结论:LGALS3BP作为正向调节因子参与IFN-?酌介导的抗HBV过程。 相似文献