原代培养的大鼠心房肌细胞间隙连接的超微结构研究

用原位包埋超薄切片技术,研究了原代培养的大鼠心房心肌细胞的间隙连接(gap junction)的超微结构。观察到一种GJ结合的小泡(GJ—associated vesicle,GJAV)和一种质膜包绕的颗粒群体,其中某些较大的群体内含环状GJAV复合体(concatenate GJAV complexes,CGJAVC)。我们发现,这两种结构都紧邻细胞质膜,位于细胞间隙区域,同时又常伴随已组装好的GJ。因此,我们推测GJAV和CGJAVC是GJ的前体或中间产物。文章分析了观察结果,并进一步探讨了心肌细胞GJ的形成过程。     

蛋白激酶Cα过表达导致正常人胚肺成纤维细胞生长失调的研究

采用自行构建的过表达ＰＫＣα亚类的正常人胚肺细胞模型,观察到细胞生长加速,血清依赖性明显下降,细胞形态发生变化,单层培养丧失接触抑制性,出现岛状生长,与对照组细胞相比,贴壁依赖性下降,在软琼脂中能形成小集落,细胞中微丝发生部分解聚,进一步检测观察到细胞中与转化密切相关的ｒａｓ癌基因表达明显增强,抑癌基因ｐ５３表达下降．首次表明在正常人胚肺细胞中ＰＫＣα的过表达直接导致细胞增殖加速,并可诱导出现部分转化特征．因此,ＰＫＣα的过表达与活化可能在细胞多阶段致癌过程中发挥着重要作用,而癌基因表达的增强与抑癌基因表达减弱可能是其作用分子机理之一．     

蛋白激酶Cα过表达导致正常人胚肺成纤维细胞生长失调的研究

采用自行构建的过表达ＰＫＣα亚类的正常人胚肺细胞模型,观察到细胞生长加速,血清依赖性明显下降,细胞形态发生变化,单层培养丧失接触抑制性,出现岛状生长,与对照组细胞相比,贴壁依赖性下降,在软琼脂中能形成小集落,细胞中微丝发生部分解聚,进一步检测观察到细胞中与转化密切相关的ｒａｓ癌基因表达明显增强,抑癌基因ｐ５３表达下降。首次表明在正常人胚肺细胞中ＰＫＣα的过表达直接导致细胞增殖加速,并可诱导出现部分     

二酰甘油－蛋白激酶C信使系统在LA90细胞转化中的作用

以ＬＡ９０细胞（ＲＳＶ温度敏感突变株ＬＡ９０转化的小鼠成纤维细胞〕为模型,研究了二酰甘油（ＤＧ）－蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）信使系统在细胞转化中的作用。通过免疫沉淀法观察到ＬＡ９０细胞在允许温度（３３℃）时具有很高的ｐｐ６０ｖ－ｓｒｃ激酶活性,远高于非允许温度（３９℃）,当从３９℃转至３３℃１０分钟,激酶活性就已显著升高。同时运用３Ｈ－甘油掺入并结合板层析分离方法和酶活性测定,发现ＬＡ９０细胞中ＤＧ含量和ＰＫＣ活性在３３℃条件下高于３９℃,当由３９℃转至３３℃１０分钟,细胞内ＤＧ含量和ＰＫＣ活性均明显增加。我们进一步探讨了ＰＫＣ活性与癌基因ｖ－ｓｅｒ、ｐ５３基因表达的相关性,实验表明,ＰＫＣ的激活剂ＴＰＡ可刺激３９℃条件下的ＬＡ９０细胞中ｖ－ｓｒｅ和ｐ５３基因表达,ＰＫＣ选择性抑制剂Ｈ７可抑制３３℃条件下ＬＡ９０细胞中ｖ－ｅｒｃ和ｐ５３基因表达。看来,ｐｐ６０ｖ－ｓｒｃ可通过刺激磷脂酰肌醇（ＰＩ）代谢激活ＤＧ－ＰＫＣ（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ－ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ）信使系统,后者通过某种途径调控ｖ－ｓｒｃ和ｐ５３等癌基因之表达。因此ＤＧ－ＰＫＣ信使系统可能是ｐｐ６０ｖ－ｓｒｃ转化细胞及被转化细胞维持转