灰盖鬼伞过氧化物酶功能表达及部分酶学特性

摘要:【目的】旨在用毕赤酵母高效表达灰盖鬼伞过氧化物酶。【方法】借助DNAworks 3.1软件设计、优化引物,用自己构建的基因合成、定点突变平台合成了毕赤酵母密码子偏好性的灰盖鬼伞过氧化物酶基因,测序后构建在表达载体pPICZαA上,整合于巴斯德毕赤酵母GS115染色体,来自酿酒酵母的α因子作为信号肽序列指导重组蛋白的分泌表达。从82个PCR检测为阳性的酵母转化子中筛选出6株高Zeocin抗性的菌进行表达,选表达酶活性最高的作为实验菌株命名为CIP/GS115。【结果】以ABTS为底物时,CIP/GS115 在甲醇诱导第4天酶活最高达到487.5 U/mL,是目前摇瓶培养诱导表达灰盖鬼伞过氧化物酶活性最高报道。纯化后的酶最适反应温度为25℃,45℃酶反应速度是最适温度时的61.5%,在低于40℃时比较稳定,超过45℃稳定性迅速下降。最适反应pH 为5.0,在pH 4.5－6.5之间比较稳定。以不同的底物研究纯酶底物特异性发现最适底物的顺序是:ABTS ＞ 愈创木酚＞ 2,6-二甲氧苯酚＞ 2,4-二氯苯酚＞ 苯酚。【结论】灰盖鬼伞过氧化物酶在毕赤酵母中的高效分泌表达和高的特殊活性为该酶在废水处理、染料脱色等方面的工业化应用奠定了一定基础。     

一株糖蜜酒精废水净化菌Lysinibacilus sp.S6的筛选与鉴定

高效的微生物菌种在废水生化处理中是保证高处理效率的关键。从处理糖蜜酒精废水的活性污泥中,经驯化、分离纯化,筛选到一株能在以糖蜜酒精废水为唯一碳源进行生长的微生物菌株,生理生化和16S r DNA基因序列分析初步鉴定为赖氨酸芽孢杆菌属,命名为Lysinibacilus sp.S6。该菌株在糖蜜酒精废水COD浓度为105 851.15 mg/L,温度为37℃左右,不添加任何微量元素的情况下,COD去除效果较为理想,48 h可达64.22%。此外,该菌还具有一定的脱氮除磷作用。Lysinibacilus sp.S6在糖蜜酒精废水的微生物处理中有很好的应用前景。