Peg3, Cdkn1c和 Gtl2基因在克隆绵羊和自然分娩绵羊中的DNA甲基化水平检测

尽管研究证明很多克隆动物存在DNA甲基化异常的情况,却很少有研究比较克隆绵羊与自然分娩绵羊之间的甲基化情况,可能是由于克隆绵羊的获得、绵羊基因组、绵羊基因组印记等因素的限制．本研究中,为了证明克隆绵羊重编程的状况,克隆了Peg3基因的差异甲基化区域(differential methylated region,DMR),并且分析了Peg3、Cdkn1c、Gtl2在克隆绵羊和自然分娩绵羊不同组织中的甲基化水平．研究发现,在克隆绵羊和自然分娩绵羊中Peg3呈现为超甲基化水平,在克隆绵羊的肾脏和肺脏中DNA甲基化水平为95.45%、81.18%,相对于正常分娩的绵羊组织中的98.18%、87.27%无显著性差异,而Cdkn1c在两组实验动物中的肾脏和肺脏中表现为非甲基化水平,分别为0%、0.53%、0.53%和0.53%,Gtl2则是低甲基化水平,并且克隆绵羊与正常分娩绵羊之间的DNA甲基化水平无显著性差异(r² = 0.77)．这些结果表明,Peg3、Cdkn1c、Gtl2三个印记基因在克隆绵羊和自然分娩绵羊组织中呈现类似甲基化水平,无显著性差异．     

马卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植技术

在马(Equus caballus)的繁殖和非繁殖季节,本研究探讨马扩展型(Ex)和紧凑型(Cp)卵丘-卵母细胞复合体(COCs)卵母细胞的孤雌激活效率。在繁殖季节,探讨马驹和成年马成纤维细胞核移植(SCNT)的成功率。孤雌激活实验结果显示,在繁殖季节,发育到2-细胞、4-细胞和桑椹胚的比例,扩展型(Ex)卵丘-卵母细胞复合体分别是52.8%(19/36)、38.9%(14/36)和5.6%(2/36),紧凑型(Cp)卵丘-卵母细胞复合体分别是47.9%(23/48)、33.3%(16/48)和6.2%(3/48)。在非繁殖季节,发育到2-细胞、4-细胞的比例,扩展型(Ex)分别是37.2%(16/43)和16.3%(7/43),紧凑型(Cp)的比例分别是35.1%(27/77)和11.7%(9/77),都没有获得桑椹胚。同一季节,扩展型(Ex)与紧凑型(Cp)胚胎发育的比率差异不显著(P 0.05),不同季节,两者差异显著(P 0.05)。体细胞核移植实验结果显示,以马驹成纤维细胞作为核供体细胞,胚胎发育到2-细胞、4～8细胞和桑椹胚的比例分别是41.5%(22/53)、33.9%(18/53)和15.1%(8/53),以成年马成纤维细胞作为核供体细胞,比例分别是38.9%(7/18)、22.2%(4/18),没有获得桑椹胚。综上所述,季节和卵丘-卵母细胞复合体(COCs)类型影响马卵母细胞孤雌激活的效率,不同核供体细胞影响克隆胚胎构建的成功率。     

细菌抗生素耐药机制研究进展

随着抗生素的广泛使用,细菌对抗生素的适应性越来越普遍。本研究对细菌获得性抗药性的形成、传递机制以及细菌耐药机制进行综述;同时阐述药物间相互作用在抗药性方面的应用,指出药物间协同作用在降低细菌抗药性方面的优势与弊端,同时提出药物拮抗作用在降低细菌抗药性方面的应用前景,旨在为寻找更加合理的用药方法提供理论依据。     

多异瓢虫气味结合蛋白HvarOBP2的基因克隆及配体结合特性分析

【目的】本研究旨在克隆多异瓢虫Hippodamia variegata气味结合蛋白(odorant-binding proteins, OBPs)基因HvarOBP2,并解析这一蛋白的配体结合特征。【方法】采用BLAST和生物信息学技术从多异瓢虫成虫触角转录组中鉴定候选气味结合蛋白基因HvarOBP2,PCR特异扩增HvarOBP2基因全长cDNA序列;通过体外原核表达和亲和柱层析等手段获得HvarOBP2重组蛋白;运用荧光竞争结合实验测定重组蛋白HvarOBP2与40种植物挥发物组分以及24种蚜虫相关挥发物组分的结合能力;使用PyMOL1.9.0进行重组蛋白HvarOBP2与4种配体(β-紫罗兰酮、邻苯二甲酸二丁酯、油酸和橙花叔醇)的分子对接模拟。【结果】HvarOBP2(GenBank登录号：OK340816)开放阅读框(open reading frame, ORF)长447 bp,其编码蛋白N端有17个氨基酸组成的信号肽,具有6个保守的半胱氨酸位点,属于classical OBPs亚家族。荧光竞争结合实验结果表明,重组蛋白HvarOBP2与植物挥发物组分油酸(解离常数K     

内质网应激分子GRP78 对非小细胞肺癌的诊断价值研究

目的:探讨内质网应激分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值。方法:收集45例NSCLC患者术后癌组织标本,及其18例癌旁组织,采用实时定量PCR法检测所有组织中GRP78的表达情况,分析NSCLC癌组织中GRP78的表达与患者临床特征的关系,及其对患者生存期的影响。结果:NSCLC组织中GRP78高表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。而Ⅲa期NSCLC患者癌组织中GRP78的表达水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期,两者存在显著性的差异(P0.05)。Kaplan-Meier分析显示,GRP78高表达的患者其生存期明显低于GRP78低表达的患者(P0.05)。结论:NSCLC患者GRP78的表达可能与肿瘤细胞的发生、发展及患者的生存期有关,可作为一个预测NSCLC患者诊断及治疗的重要的分子标志物。     

参一胶囊对晚期NSCLC 维持治疗的临床研究

目的:探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗获益后采用参一胶囊维持治疗的临床疗效。方法:选择2010年11月到2014年11月在我院经一线化疗后疗效评价无病情进展的120例晚期NSCLC患者,随机分为对照组(n=60)和实验组(n=60)。对照组仅接受定期随访观察,实验组采用参一胶囊维持治疗,比较两组患者治疗后的临床疗效、治疗前后免疫功能、生活质量的变化及不良反应的发生情况。结果:实验组患者的疾病控制率(DCR)明显高于对照组(P0.05)。治疗后,两组患者各免疫功能检测指标均低于治疗前,且实验组明显大于对照组(P0.05)。治疗后,实验组KPS评分提高率明显高于对照组(P0.05)。整个维持治疗过程中无治疗相关性死亡。结论:晚期NSCLC患者在化疗后采用参一胶囊维持治疗,可显著提高患者免疫功能、改善生活质量,且安全性良好,疗效显著,值得在临床上推广应用。     

DNA损伤修复反应的双刃剑效应在肿瘤与衰老发生发展中的作用

人类生存环境中的有害物质、机体正常代谢产生的氧化自由基、端粒缩短或端粒酶活性改变、原癌基因激活或抑癌基因失活等均可造成DNA损伤。通过启动DNA损伤修复反应,激活p53/p21或p16/Rb信号转导途径可以引发细胞周期阻滞,为修复破损的DNA赢得时间,避免不完整的DNA信息继续传递下去。过度的细胞周期阻滞将引起不可逆的细胞增殖停滞并最终引起细胞衰老,而当损伤的DNA没有完全修复就无限制的进入细胞周期时,将会诱发肿瘤的形成。肿瘤和衰老的发生机制是相互对立、相互交织的,而DNA损伤修复反应是联系二者的纽带。