快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

发展了一个利用煮沸法快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板的程序,成功地从低拷贝的ARSCEN酵母质粒和酵母基因组扩增到了相应基因。     

利用嵌合RNA：DNA寡聚核苷酸进行核酸序列突变

动物中内源基因的单核苷酸突变可以引起多种单基因疾病。传统的基因疗法大多利用外源基因的导入 ,由于转基因的效率和外源基因表达上存在问题 ,这种基因疗法有一定的局限性。本文介绍的利用嵌合ＲＮＡ :ＤＮＡ寡聚核苷酸 (ＲＤＯ)在ＤＮＡ水平上对突变基因进行修复是一种新的基因疗法。这种基因疗法同样适用于植物 ,并且在植物功能基因组的理论研究中有重要作用。1　嵌合ＲＮＡ :ＤＮＡ寡聚核苷酸 (ＲＤＯ)的分子结构ＲＤＯ有一段五碱基长的ＤＮＡ序列 ,除了突变的位点以外 ,与靶基因互补。五碱基的ＤＮＡ序列两旁各有 1 0个 2’ -Ｏ -甲基…     

体蛋白传导及其在生物学上的应用前景

蛋白传导域PTDs是在蛋白传导过程中能高效穿过生物膜的结构域,其可以使所有细胞作为传导对象,而且具有相当高的传导效率,但其传导的机制尚不明了。目前所发现高效的PTDs有Tat,VP22,ANTP,当它们形成嵌合蛋白,或与蛋白质,多肽,DNA等分子化学相连,用于化合物的体内传导时,无论对于生物学土的理论问题还是基因治疗中的实际应用都有重大的意义。     

利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

制备基因组ＤＮＡＰＣＲ模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组ＤＮＡ ,然后做ＰＣＲ扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组ＤＮＡＰＣＲ模板的程序 ,具有良好的重复性。1　材料与方法1.1　材料酿酒酵母菌种 1ｃ163 6ｄａｒｇ11,ｕｒａ 3为比利时ＯｒｉａｎｅＳｏｅｔｅｎｓ馈赠。酵母载体ｐＹＸ13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉ａｒｇ 13ｃＤＮＡ的酵母表达载体ｐＹＸＡ5。培养基为ＳＤ或ＹＰＤ固体培养基。1.2　酵母质粒提取[3]取 1.5ｍｌ…     

利用微波炉高通量制备大肠杆菌质粒

利用微波炉可以简单、快速地高通量制备大肠杆菌质粒。     

酵母基因组DNA的两个简易制备方法

酵母基因组ＤＮＡ的制备一般需要制作原生质体。我们基于丝状真菌的方法[1,2 ] 发展了 2个酵母基因组ＤＮＡ的制备程序 ,取得了良好的效果。1　材料与方法1.1　材料菌种　野生酿酒酵母菌种Ｇ1Ｍ 2 34为本中心周惠副教授惠赠。1.2　方法1.2 .1　酵母基因组ＤＮＡ制备方法　①方法 1:接种酵母菌种于无菌的 5 0ｍＬＹＰＤ或ＳＤ培养基 ,在30℃生长至对数生长晚期。滤液 4 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心10ｍｉｎ。菌体用液氮碾磨破壁。加 7ｍＬＤＮＡ缓冲液 (10 0ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ,ｐＨ 8.0 ,10ｍｍｏｌ/ＬＥＤ ＴＡ ,1%ＳＤＳ)。混匀 ,6 5℃保…     

一种粗糙脉孢霉基因组DNA的快速制备方法

粗糙脉孢霉基因组ＤＮＡ的制备方法一般很费工费时。ＷｅｎｄｌａｎｄＪＡ等人发展了一种丝状真菌的ＤＮＡ提取方法 ,应用在裂褶菌取得了良好的效果[1] 。本文基于该方法制备粗糙脉孢霉基因组ＤＮＡ也取得了成功 ,应用ＰＣＲ从基因组扩增出了一个与无机焦磷酸酶有同源性的基因。1　材料与方法1 1　菌种 :粗糙脉孢霉 (Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａｃｒａｓｓａ)菌种 490 7ｐｒｄ - 4 ,ｂｄＡ ,来自ＦｕｎｇａｌＧｅｎｅｔｉｃｓｓｔｏｃｋｃｅｎｔｅｒ,ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＫａｎｓａｓＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒ,Ｋａｎｓａｓ ,ＵＳＡ。1 2…     

大肠杆菌质粒DNA PCR模板的快速制备

在分子遗传学的研究中要频繁地用到ＰＣＲ的方法。本文基于粗糙脉孢霉的方法[1] 发展了快速制备大肠杆菌质粒ＤＮＡＰＣＲ模板的程序 ,具有良好的重复性 ,为分子遗传学研究提供了快速有效的方法。收稿日期 :2 0 0 1 - 1 0 - 2 0 ;修回日期 :2 0 0 1 - 1 1 - 2 1基金项目 :广东省自然科学基金 (Ｎｏ.980 30 3) ;国家自然科学基金 (Ｎｏ .30 0 70 4 2 0 ) ;教育部高等学校骨干教师计划资助项目 (Ｎｏ.2 0 0 0 - 0 61 -31 4 30 1 )作者简介 :罗樨 (1 977- ) ,女 ,硕士 ,从事生物钟研究。图 1　质粒ＤＮＡＰＣＲ扩增结果1 ＤＬ2 0 0 0分子量标…     

昼夜生物钟、负反馈调节与翻译后修饰

到目前为止 ,几乎在所有类型的生物中发现了昼夜生物钟。它们以约 2 4小时的周期控制着众多的分子、生理和行为过程[1、2 ] 。一个典型的例子是 ,我们的睡眠、清醒过程受昼夜钟控制 ,并受光、温对相位的重拨 ,以及地球 2 4小时昼夜的约束。不仅如此 ,我们的中心体温、某些激素分泌、生化过程均受生物钟控制。研究发现 ,对某些药物而言 ,一天中某个时候给药会得到最好的效率。乘飞机的时差反应、三班倒都是生物钟系统对环境表现的不适应 ,尽管昼夜钟的相位能即时得到调整 ,但生物钟控制的过程需要一定的时间才能得到适应。生物钟的普遍性、基…