腺苷酸激酶基因在大肠杆菌中的可溶性高表达

报道了鸡肌腺苷酸激酶基因的克隆和在温控启动子P_RP_L调控下在大肠杆菌中的可溶性高效表达.SDS-PAGE分析表明,鸡肌腺苷酸激酶的含量可占大肠杆菌细胞总蛋白含量的38％.利用Johnson等的干冰/乙醇-冰水浴反复冻融法,可将此重组蛋白进行富集,纯度可达85％以上.鸡肌腺苷酸激酶可与抗兔肌腺苷酸激酶单克隆抗体产生强的交叉反应.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分型及流行现状

【目的】研究杭州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的基因型别,探讨MRSA菌株流行变化趋势及进化特点,为该地区MRSA的进一步防治提供科学依据。【方法】对86株MRSA进行葡萄球菌盒式染色体SCCmec基因、spa基因分型,并开展多位点序列分型(Multi-locus sequence typing,MLST),与国际上MRSA的流行型别进行比较,分析进化关系。【结果】86株MRSA共发现13个spa型(以t311型为主,占48.8%;其次为t6418型,占11.6%);MLST分型共发现9个ST型(以ST5为主,占59.3%;其次为ST239,占16.3%),经e BURST软件分析它们属于4个群(Group 1、Group 6、Group 8、Group 12)和8种克隆复合体(CC1、CC5、CC630、CC20、CC59、CC88、CC239、CC573);SCCmec基因分型以SCCmecⅡ型为主,占61.6%;其次为SCCmec III型,占22%;5株社区相关性MRSA(SCCmec-Ⅳ型)。其中第一流行克隆型为SCCmec-Ⅱ-ST5-t311-CC5(占47.7%)、其次为SCCmec-III-ST239-t030/t037-CC239(占12.8%)。【结论】SCCmec-Ⅱ-ST5-t311为杭州地区当前流行菌株;CA-MRSA菌株的出现,提示MRSA菌株有由医院向社区播散的趋势;此外,对新发展了单位点变体的菌株(SCCmec-Ⅰ-ST1921-t164-CC20和SCCmec-Ⅳ-ST965-t062-CC5),应加强重视。     

溶氧水平对红豆杉细胞悬浮培养的影响研究

紫杉醇 (Ｔａｘｏｌ)是源自红豆杉提取物的一种高度衍生化的二萜类化合物 ,临床实验结果表明紫杉醇对于卵巢癌、乳腺癌、胃肠道癌等具有明显的抗肿瘤活性[1] ,因而受到世界各国的广泛关注 ,并已被美国食品与药品管理局 (ＦＤＡ)批准用于卵巢癌与乳腺癌的治疗[2 ] 。到目前为止紫杉醇仍然主要从树皮中提取 ,但由于红豆杉生长缓慢 ,天然资源非常有限 ,加快其替代来源的研究势在必行。利用植物细胞悬浮培养生产紫杉醇作为一种可行的选择 ,近年来取得了较大的进展[3 ,4 ] 。本文研究了摇瓶及 2 0 Ｌ反应器培养过程的溶氧水平对细胞生长及紫杉醇…     

不同施肥水平对桢楠多胚苗生长及光合生理的影响

采用营养袋培育的方法,以苗龄45d(根茎初步木质化)的桢楠幼苗为试验材料,选取单胚苗(D)、双胚大苗(SD)和双胚小苗(SX)3种类型桢楠幼苗栽植于袋中,根据年施复合肥量标准设置对照(CK,每袋0g)、中(M,每袋0.2g)和高(H,每袋0.3g)3个施肥水平,于7月初开始施肥,每20d施1次共分4次(每次25%)施入,分别于8月、10月中旬测定幼苗生长指标和光合生理指标,探讨施肥对桢楠多胚苗生长和光合生理的影响。结果显示:(1)中量施肥(M)对3类幼苗的苗高和地径生长量有明显的促进作用,而高量施肥(H)在整个试验过程中对幼苗生长的影响表现为先促进后抑制的趋势。(2)中量施肥(M)可以促进3类幼苗叶片的叶绿素合成,延长叶片功能周期,增大净光合速率和气孔导度,进而提高幼苗在强光照、高CO_2环境下的光合作用能力。(3)中量施肥可以使幼苗的光补偿点(LCP)、CO_2补偿点(CCP)下降,光饱和点(LSP)、CO_2饱和点(CSP)上升,增强幼苗适应环境的能力,积累更多的有机物;高量施肥对幼苗的光合指标也表现为先促进后抑制的作用。研究表明,适量(每袋0.2g)施肥能促进各类桢楠幼苗光合色素合成、光合作用效率以及对环境的适应能力,从而促进幼苗的生长;适量施肥也使双胚大苗较快缩小与单胚苗生长指标间的差距,同时也对双胚小苗生长表现出一定的促进作用,这对于促进珍贵树种桢楠的种质资源保护、提高苗木出圃率和降低育苗成本有重要意义。     

植物生长物质在胚培养法挽救陈年小麦种质中的作用

以陈年小麦离体胚为外植体,MS培养基为基本培养基,附加5种植物生长物质2,4-D、NAA、KT、6-BA、GA3进行单因子和正交试验,研究植物生长物质在陈年小麦离体胚萌发中的作用。单因子试验结果表明：单独使用6-BA 1．0mg／L、GA3 2．5mg/L均能在一定程度上促进陈年小麦离体胚出芽和生根,出芽率分别为70．0％和77．5％,比对照分别提高了21．7％和29．2％;生根率分别为63．3％和72．2％,比对照分别提高了21．3％和30．2％。正交试验结果显示GA3对陈年小麦离体胚的萌发影响显著,最佳植物生长物质组合为2,4-D2．0mg／L NAA 1．1mg／L 6-BA0．5mg/L GA3 4．0mg/L,出芽率为82．5％,生根率为60．0％,比对照分别提高了32．5％和17．5％。     

红豆杉细胞悬浮培养结构化数学模型的探讨

用１０Ｌ机械搅拌式生物反应器悬浮培养红豆杉细胞,得到细胞生长、基质消耗和紫杉醇合成动力学曲线。经过代谢动力学分析建立了结构化数学模型。并将模型值与实验值进行比较,结果表明模型预测值与实验值较吻合。     

植物代谢基因簇的研究进展

植物产生大量结构和功能多样的次生代谢物,它们在植物生长发育和植物响应非生物和生物胁迫过程中发挥着不可或缺的作用.近年来,植物代谢基因聚集成簇现象受到了广泛关注,而基因组、转录组和代谢组等多组学技术的快速发展使得高效挖掘植物代谢基因簇成为可能.另一方面,植物代谢基因簇研究也将为发掘和利用植物次生代谢物多样性提供新的见解....     

青苹果对高脂模型雄性大鼠AMPK-ACC信号通路的作用

探究青苹果汁对高脂模型雄性大鼠AMPK-ACC信号通路的影响。将雄性SD大鼠70只随机抽取20只做空白对照组用基础饲料喂养。其余用高脂高糖饲料建立高脂模型,分别在第4周和第8周用ELISA法检测血清指标,与空白组比较,在确定高脂模型建立成功后随机分为5组:阴性对照组(高脂模型组),阳性对照组,青苹果高、中、低剂量组,每组10只。各组动物按各自药物和剂量灌胃给药,其中阳性对照组给予白藜芦醇0.1mg/10g,高、中、低剂量青苹果组分别给予0.3mL/10g、0.2mL/10g、0.1mL/10g剂量青苹果汁,空白对照组和阴性对照组给予0.1mL/10g蒸馏水灌胃。1次/d,连续给药8周后处死动物,采用RT-PCR检测各大鼠肝组织AMPK、ACCmRNA的表达,Westernblotting检测AMPK、ACC活性表达水平。与高脂模型(阴性对照)组比较,高、中剂量青苹果组AMPKmRNA与AMPK蛋白表达增强而ACCmRNA与ACC蛋白表达减弱且有统计学意义(p0.05)。高、中剂量青苹果可通过激活AMPK-ACC信号通路,进而刺激脂肪酸的氧化,最终达到降脂效应。     

利用RNAi技术分析VP16对HSV-1增殖过程的影响

目的:探讨在RNAi技术条件下,HSV-1感染Vero细胞过程中,病毒间层蛋白VP16的生物学功能。方法:用T7RNA聚合酶体外合成针对VP16 mRNA的3种T7siRNAs。用Lipofectamine 2000脂质体转染Vero细胞后接种HSV-1,感染后12、24、36、48、60和72h,分别收取实验组和对照组标本,Karber法计算病毒滴度值,绘制子代病毒一步生长曲线。结果:病毒子代一步生长曲线显示,转染siRNAs的实验组Vero细胞接种HSV-1后24h(24h pi),病毒滴度明显低于对照组;12h pi也观察到病毒滴度低于对照组的现象;siRNAs具有协同作用,三种siRNAs同时作用时干扰效果最为明显;实验组病毒滴度高峰出现时间后移12h左右。结论:HSV-1间层蛋白VP16对病毒复制、成熟起重要的生物学作用。