人降钙素基因克隆表达和重组产物的纯化

人降钙素(hCT)在治疗骨质疏松、高血钙和骨肿瘤等方面具有广泛的用途。但是,目前临床使用的制剂,主要依赖国外肽合成方法制备。 本文介绍基因工程技术制备和纯化重组人降钙素的过程。首先用亚磷酸酰胺法将hCTcDNA分成6个寡聚核苷酸片段化学合成,经磷酸化、连接反应,克隆于pGEM7z载体。DNA序列测定证明,hCT DNA结构与预期的一致。     

基因工程制备重组人降钙素类似物

构建融合表达人降钙素类似物的工程菌 ,然后纯化 GST- h CTa- Leu融合蛋白 ,凝血酶酶切后 ,再经离子交换层析、脱盐 ,获得纯度大于 90 %的 h CTa前体 .对 h CTa前体的 C末端进行修饰 ,得线形 h CTa- NH2 ,再通过复性 ,获得了具有与天然人降钙素活性相当的 h CTa.