冰醋酸致小鼠实验性腹膜炎模型的研究

目的研究建立小鼠实验性腹膜炎模型,探讨建立一种简便、易行、效果稳定、便于获取实验数据的实验方法。方法小鼠腹腔分别注射2%冰醋酸生理盐水溶液0.1 ml(高浓度组)、1%冰醋酸生理盐水溶液0.2 ml(低浓度组),观察小鼠一般情况及腹腔解剖情况,进行血细菌培养;肝、回肠组织病理学观察;比色法测定肝、回肠LDH活性和MDA含量。结果注射不同浓度和剂量的冰醋酸,均表现出腹膜炎临床征象,高浓度组的小鼠模型病程快、死亡率高,血细菌培养有大量G-杆菌;低浓度组的小鼠模型,经21 d可自愈,无死亡。组织病理学观察,肝和回肠有病理改变。结论高浓度组的小鼠腹膜炎模型可作为急性腹膜炎的实验研究模型,低浓度组的小鼠腹膜炎模型,可作为研究实验性腹膜炎自愈过程机体抗损伤机制的实验模型。     

杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A~(loop)的H321对其酶学性质的影响

目的:将loop置换杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A~(loop)的H321突变回野生型酶AuMan5A对应的Gly,以分析杂合酶的酶学性质与H321的相关性。方法:采用大引物PCR技术将AuMan5A~(loop)基因(Auman5Aloop)编码H321的密码子CAC突变为Gly的GGT,构建突变酶基因Auman5A~(loop/H321G);借助表达质粒pPICZαA将该突变酶基因在Pichia pastoris GS115中实施表达,并分析重组表达产物AuMan5A~(loop) H321G的酶学性质。结果:AuMan5A~(loop/H321G)置换前后的最适温度T_(opt)均为75℃,高于AuMan5A的65℃;AuMan5A~(loop/H321G)在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)为300 min,介于AuMan5A(10 min)和AuMan5A~(loop)(480 min)之间;AuMan5A~(loop/H321G)比活性分别为AuMan5A和AuMan5A~(loop)的12.8和1.43倍;催化效率k_(cat)/K_m为后两者的14.1和1.12倍。结论:通过H321G置换及对3种酶的温度特性、比活性和催化效率的测定及比较,证实了H321对AuMan5A~(loop)的酶学性质有一定的影响。     

新型菜豆环氧化物水解酶的异源表达及对映归一性催化特性

为挖掘新型环氧化物水解酶（EH）,探讨其对映归一性催化特性,以菜豆（Phaseolus vulgaris）总RNA为模板,采用RT-PCR扩增了一种菜豆EH（PvEH1）的编码基因pveh1,并将其在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了表达。一级和三维结构分析表明,PvEH1与绿豆和苜蓿EHs的同源性分别为85.7和81.1%,其催化三联体为Asp¹⁰¹-His²⁹⁹-Asp²⁶⁴,属于α/β水解酶超家族。当PvEH1催化外消旋环氧苯乙烷水解的转化率达99.1%时,产物（R）-苯乙二醇的对映体纯度为33.6% e.e._p。PvEH1对（S）-和（R）-SO的区域选择性系数α_S和β_R分别为91.1和53.3%。PvEH1的挖掘及其对映归一性催化特性的分析不仅增加了此类植物EHs的数目,而且为其归一性催化机制的研究和区域选择性的改造奠定了基础。