pH-区带精制逆流色谱分离高F值寡肽新技术研究

高F值寡肽是一种由2～8个氨基酸组成的生理活性肽.本研究采用胃蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶对草鱼蛋白进行了两步酶解,高效液相色谱对酶解液进行了肽谱分析,以制备改善肝性脑病的高F值寡肽.结果表明,草鱼蛋白酶解液中含有高支低芳氨基酸的寡肽组分,开发一种pH-区带精制逆流色谱分离新技术,所用体系为甲基叔丁基醚:正丁醇:乙腈:水(2:2:1:5,、V/V/V/V),上相中加入20 mM三乙胺和20%磷酸二(2-乙基己基)酯(DEHPA)作为固定相,下相分两部分,分别加入10 mM HCl和20 mM HCl作为流动相,进行梯度洗脱.成功地对酶解液中的混合组分进行了分离,得到了5个高F值(F>20)的分离组分,估测其F值(F=OD214nm/DD280nm)高达24.7～36.4.该结果为利用低值鱼蛋白酶解制备功能性活性肽提供了新的制备方法.