蛋白质双向电泳、印迹转移及蛋白质合成无细胞体系技术在小鼠腹水细胞EF-3研究中的应用

本文应用近年发展起来的生化技术――蛋白质双向电泳（其第一向为等电聚焦,第二向为SDS凝胶电泳）,将小鼠腹水细胞核糖体蛋进行了指纹分离。并利用蛋白质印迹转移（Western blotting）,将转移后的硝酸纤维膜与交联了碱性磷酸酶的第二抗体和抗酵母EF-3抗体反应,证实该核糖体蛋白含有EF-3同源片段,进而制备了蛋白质合成无细胞体系。通过测定PolyU指导下3 H-phe掺入活力的免疫失活实验,初步证实此同源片段是小鼠腹水细胞蛋白质合成所必需。 The ribosomal proteins of H22a cell,were separated with the method of two-D gel electrophoresis (the first dimention is isoelectric focus and the second is SDS PAGE).Then the Western blotting was used,the transferred nitrocellulose sheet was treated with antiyeast EF-3 antibody and the second antibody bonded with alklinephosphoesterase.The result shows that the ribosomal proteins have a homologous fragment to yeast EF-3 factor.The cell-free system of protein synthesis was also established.By determing the activity of polyU direeted 3H-phe intervention in immunodeactivitive experiment,it is primaril confirmed that this fragment is the esscntial for the protein biosynthesis in H22a cell.     

蛋白质双向电泳、印迹转移及蛋白质合成无细胞体系技术在小鼠腹水细胞EF-3研究中的应用

本文应用近年发展起来的生化技术――蛋白质双向电泳（其第一向为等电聚焦,第二向为SDS凝胶电泳）,将小鼠腹水细胞核糖体蛋进行了指纹分离。并利用蛋白质印迹转移（Western blotting）,将转移后的硝酸纤维膜与交联了碱性磷酸酶的第二抗体和抗酵母EF-3抗体反应,证实该核糖体蛋白含有EF-3同源片段,进而制备了蛋白质合成无细胞体系。通过测定PolyU指导下3 H-phe掺入活力的免疫失活实验,初步证实此同源片段是小鼠腹水细胞蛋白质合成所必需。 The ribosomal proteins of H22a cell,were separated with the method of two-D gel electrophoresis (the first dimention is isoelectric focus and the second is SDS PAGE).Then the Western blotting was used,the transferred nitrocellulose sheet was treated with antiyeast EF-3 antibody and the second antibody bonded with alklinephosphoesterase.The result shows that the ribosomal proteins have a homologous fragment to yeast EF-3 factor.The cell-free system of protein synthesis was also established.By determing the activity of polyU direeted 3H-phe intervention in immunodeactivitive experiment,it is primaril confirmed that this fragment is the esscntial for the protein biosynthesis in H22a cell.     

从大肠杆菌B／r中同时制备ATP：RNA腺苷酰转移酶和多核苷酸磷酸化酶

本文报道了从大肠杆菌B／r中同时制备ATP：RNA腺苷酰转移酶和PNPase的简便方法。菌体经压力破碎,聚乙二醇、葡聚糖分相抽提及磷酸纤维素柱层析得到ATP：RNA腺苷酰转移酸。其滤液经DEAE纤维素柱层析和Scphadex G-200凝胶过滤得到PNFasc。用Oligo dT纤维素和聚丙烯酰胺凝胶电泳对酶反应产物作了初步鉴定。     

核糖核蛋白体的结构与功能

核糖核蛋白体(Ribosome,亦称核蛋白体)是一种重要的细胞器。它是细胞内蛋白质生物合成的基地。无论原核细胞(细菌)或真核细胞(动植物),凡有蛋白质合成,都一定有核糖核蛋白体的参加。大肠杆菌无细胞制剂(包括核糖核蛋白体)是研究蛋白质生物合成的一个很理想的体系。它在阐明遗传密码子的编排工作中,发挥了非常重要的作用,对于分子生物学的发展有重大的贡献。鉴于上述原因,二十多年来,生物化学家与大肠杆菌核糖核蛋白体交往     

文昌鱼核糖核蛋白体结构与功能的研究——Ⅰ. 文昌鱼tRNA和5SRNA的制备

本文报导了从厦门白氏文昌鱼(Branchiostoma belcheri Gray)中制备tRNA和5S RNA的方法。将文昌鱼洗净,用搅碎机破碎,然后用苯酚法提取小分子RNA。RNA粗制品经DEAE—纤维素DE22、DEAE—Sephadcx A—50和Sephadex G—100柱层析分离纯化,分别得到tRNA和5S RMA。再用12％聚丙烯酰胺疑胶电泳进一步纯化。测定了tRNA接受甘氨酸、丙氨酸和酪氨酸的活力分别为6.3％、5.2％和21％—25％。 tRNA的主要生物功能是携带与转移氨基酸参与蛋白质生物合成,并对基因表达进行调节控制。5S RNA是核糖核蛋白体的一个组分,在蛋白质生物合成中具有重要的功能,也是研究生物进化比较理想的一种生物大分子。自Hoagland等(1957)发现tRNA及Tissieres等(1959)发现核糖核蛋白体RNA后,科学工作者便广泛地开展了对tRNA和5SRNA结构与功能的研究。 文昌鱼是一种处于脊椎动物与无脊椎动物之间过渡类型的脊索动物,属脊索动物门的头索亚门,最接近脊椎动物亚门。因此对它进行深入的生化研究,在探索生物进化方面有较大的学术意义。本文报告从文昌鱼中制备tRNA和5SRNA以及tRNA接受氨基酸活力的初步结果。