冻结速率对血小板冷冻干燥保存的影响

冷冻干燥法是使血小板能够长期保存的一种理想方法。冻结过程对血小板的冻干保存至关重要。采用梯度降温、搁板预冷、液氮冻结等三种冻结方式,研究了冻结速率对血小板冷冻干燥保存恢复率的影响。实验结果表明用搁板预冷的方式冻结并干燥的血小板复水后的恢复率最高,达到(93.0.2)%,此时的冻结速度约为10℃/min。扫描电镜照片显示冻干复水后的血小板保持了完整的细胞结构,但与新鲜血小板相比略呈球形。冻干复水后的血小板对1U/ml凝血酶的最大聚集率接近于新鲜血小板,但聚集速度比新鲜血小板慢。     

海藻糖载入血小板的研究

将不可渗透型的保护剂海藻糖有效地载入血小板内部是用冷冻干燥法保存血小板重要的第一步。研究血小板对海藻糖的载入量随外部海藻糖浓度、孵化时间、孵化温度改变的变化规律,发现在细胞外海藻糖浓度为50mmol/L、孵化温度37℃、孵化时间4h的条件下,血小板能有效地吸收海藻糖,细胞内海藻糖浓度达到15mmol/L以上。对孵化后的血小板进行形态观察、血液学分析和膜联蛋白(annexin)V结合活化分析,结果表明孵化后的血小板保持了正常血小板的形态和功能。     

浙江汉族人群细胞因子基因多态性分析

为了探讨浙江汉族人群13种细胞因子基因多态性的分布情况, 采用PCR-SSP对100名汉族人群的IL-1α(T/C-889)、IL-1β(C/T-511, T/C+3962)、IL-1R(C/T Pst-I 1970)、IL-1RA(T/C Mspa1-I 1100)、IL-2 (T/G -330, G/T +166)、IL-4 (T/G -1098, T/C -590, T/C -33)、IL-4Rα(G/A +1902)、IL-6 (G/C-174, G/A nt565)、IL-10 (G/A -1082, C/T -819, C/A-592)、IL-12(C/A -1188)、gIFN (A/T UTR 5644)、TGFβ(C/T codon 10, G/C codon 25)、TNFα(G/A -308, G/A -238)等细胞因子基因多态性进行分型。结果显示, (1)在检测的13种细胞因子中, TGF(G codon 25)等位基因频率为1.00, 未检测到TGF(C codon 25)等位基因; (2)细胞因子等位基因频率大于0.95的有IL-1α(C-889)、IL-1β(C +3962)、IL-4 (T –1098)、IL-6 (G-174)、IL-6(G nt565)、IL-10(A –1082)和TNFa (G -238); 频率低于0.05的有IL-1α(T -889)、IL-1β(T +3962)、IL-4(G –1098)、IL-6 (A-174)、IL-6 (A nt565)、IL-10 (G –1082) 和TNFa (A -238); (3) IL-10高表达单倍型GCC频率为0.05, 低表达单倍型ATA频率为0.735; TGF β高表达单倍型TG频率为0.49, 低表达单倍型CC频率为0; TNF a高表达单倍型AG和AA频率为0.055, 低表达单倍型GG和GA频率为0.945。结果表明, 浙江汉族人群细胞因子基因多态性较为丰富, 具有地区性遗传特征。