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河蟹眼柄神经分泌细胞离子通道的膜片钳研究 总被引:6,自引:0,他引:6
采用全细胞膜片钳技术对培养12-24小时不同形态河蟹眼柄视节端髓X器官(MTXO)神经分泌细胞离子通道进行了研究。结果表明,河蟹眼柄MTXO中分布的A、B、C三种类型神经分泌细胞均可记录到由向电流和外向电流组成的正常全细胞电流。内向电流由高电压激活钙离子通道电流(Lca)和对TTX敏感钠离子通道电流(INa)组成。ICa的激活电压为-30mV,在0- 20mV电压下达到峰值,在-40mV和-70mV保持电压下记录的ICa激活阈值、初始峰值及I-V曲线无明显差别。外向电流明显,幅值较大,包括对4-AP敏感的快速激活、快速失活钾离子通道电流(IA)和对TEA敏感的缓慢激活、缓慢失活钾离子通道电流(IK)。正常蟹种、二龄成蟹和早熟蟹种MTXO神经分泌细胞均表达电压门控钠、钾、钙离子通道,通道电流和电压特征无明显区别. 相似文献
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过氧化物还原酶(Prx)是生物体内广泛存在的一类酶,在消除过氧化氢和抗氧化胁迫中起着重要的作用。本研究采用PCR扩增编码中国明对虾Prx成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pCR®T7/NT TOPO® TA中进行体外重组表达。重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS后,经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行LC–ESI–MS分析,结果表明融合蛋白的四个肽段与中国明对虾Prx相应肽段完全一致。将重组蛋白通过金属螯合柱进行纯化,进而透析、复性,最后获得了具有较高过氧化物酶活性的重组Prx。中国明对虾Prx的成功表达,为深入研究其在中国明对虾免疫反应和抗氧化胁迫中的作用奠定了基础。 相似文献
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根据中国对虾蜕皮抑制激素的全长cDNA序列设计引物,以中国对虾基因组DNA为模板,采用PCR等技术分别得到3个扩增产物:NP1、NP2和NP3,长度分别是540bp、601bp和826bp。NP1和NP2均由2个外显子和1个内含子组成,NP3由3个外显子和2个内含子组成。序列分析表明,NP1、NP2和NP3是中国对虾Ⅱ型CHH家族神经肽的基因片段。NP1、NP2和NP3的外显子分别与斑节对虾的神经肽Pem-SGP-C2、Pem-SGP-C1及中国对虾FenchMIH的mRNA相似性最高,同源性分别为91.5%、92.8%、88.9%。由此可以推测NP3是中国对虾MIH的基因序列,NP1和NP2为新发现的两种中国对虾Ⅱ型CHH家族神经肽的基因片段。 相似文献
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DH10B菌株高效电转化条件探究 总被引:6,自引:0,他引:6
以pUC19、pECBAC1、pCLD04541DNA以及3个不同大小的BACDNA为材料,研究了E.coli DH10B菌株在5个不同脉冲电场下的转化效率。研究发现,随着DNA片段大小的增加,最高转化效率和最适场强迅速减小。利用DH10B细胞转化pUC19 DNA的最适场强是21kV/cm,而190kb BAC DNA仅为13kV/cm;在最适场强下,40kb BAC DNA的转化效率约是190kb BAC DNA的50倍。通过大量数据绘制了不同因素影响下转化效率的变化曲线,优化了E.coli DH10B菌株电转化条件,为质粒的重组转化以及大片段基因组文库的构建奠定了基础。 相似文献
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凡纳滨对虾各月龄性状的主成分与判别分析 总被引:8,自引:0,他引:8
为了研究凡纳滨对虾各性状增长规律和判定最佳生长季节凡纳滨对虾的体格与月龄的关系,选择1~6月龄凡纳滨对虾各1000只,选择全长、体长、第一腹节背高、第三腹节背高、第一腹节背宽、头胸甲长和体重共7个性状,进行主成分与判别分析.结果表明:各月龄凡纳滨对虾性状之间均呈现显著的正相关(P<0.01), 其中以全长与体长的相关性最为明显,1月龄凡纳滨对虾体重与形态性状的相关系数较小.各月龄凡纳滨对虾的主成分有所不同,1~2月龄凡纳滨对虾的第一主成分为长度因子,第二主成分为宽度因子,第三主成分为高度因子;3月龄凡纳滨对虾的第一主成分与1~2月龄凡纳滨对虾一致,但第二主成分为高度因子,第三主成分为体重因子;4~6月龄凡纳滨对虾的第一主成分为体重因子,第二主成分为高度因子,第三主成分为宽度因子.1~3月龄凡纳滨对虾形态性状的增长优先于体重, 4~6月龄凡纳滨对虾体重优先于形态性状的增长.错过最佳生长季节的凡纳滨对虾的与体格大小相符的月龄可通过建立的判别式来判断,总的判别准确率为98.98%,其中2~4月龄凡纳滨对虾的判别准确率为100%. 相似文献
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甲壳动物精氨酸激酶的结构与功能 总被引:6,自引:0,他引:6
精氨酸激酶(Arginine kinase)是调节无脊椎动物能量代谢的重要酶,在调节无脊椎动物体内磷酸精氨酸与ATP之间的能量平衡过程中具有重要作用。甲壳动物是节肢动物门内最重要的类群之一,并具有重要的经济价值。本文综述了甲壳动物体内精氨酸激酶的分子构象、表达变化及生理功能等方面的研究进展,为深入研究甲壳动物的能量代谢调控机制提供必要的参考。另外,文中对甲壳动物精氨酸激酶的重要性和研究中存在的问题进行了讨论。 相似文献
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利用5个高度多态性的微卫星座位(Fc04、Fc06、Fc18、Fc24、Fc27),分析了不同年份中建立的10个野生中国明对虾家系中的雌性亲虾及其后代基因型分离的情况,表明每个家系中只有一个雄性野生中国明对虾对子代的遗传有贡献.从其中3个家系的雌性亲虾纳精囊中提取了雄虾精子DNA,微卫星标记显示各家系的子代个体均有一个等位基因与雄性亲虾的基因型相符,且符合孟德尔遗传规律,这为野生中国明对虾雌虾在繁殖季节一对一的繁殖行为提供了遗传学的证据.用UPMGA的方法随机对3个家系的40尾子代个体进行聚类分析,每个家系都能被单独聚成一类.上述工作表明微卫星标记在对虾育种中作为一种有效的亲子关系分析工具,在种群的遗传结构、亲缘关系、繁殖行为等方面具有广阔的应用前景. 相似文献
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病害问题是制约我国扇贝养殖业发展的关键, 因此贝类的先天免疫也成为当前研究的热点。丝氨酸蛋白酶是先天免疫中至关重要的酶类,在许多通路中起信号放大作用。目前对栉孔扇贝丝氨酸蛋白酶的研究主要集中于基因序列分析和表达谱研究, 基因定位方面的研究尚未开展。文章以包含一种栉孔扇贝丝氨酸蛋白酶基因的BAC克隆为探针, 利用BAC-FISH技术将其定位到一对同源染色体的长臂上, 为丝氨酸蛋白酶基因的后续研究提供了基础; 同时, 利用PCR产物直接测序法筛选了该基因内部的6个SNP标记, 这些SNP标记可供遗传图谱定位使用, 从而可以实现遗传图谱与染色体间的锚定与初步整合 相似文献
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有报导,与其它动物不同,对虾的卵子一接触海水、不经过受精,就可以被活化。但是,只有受精卵才能卵裂发育。而且,各种对虾卵子内皮质棒及皮层颗粒的形态结构、活化过程各有不同。本文就中国对虾卵子的活化及卵裂过程进行了激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)研究。该技术可以清晰地显示细胞的立体图像。采集中国对虾,人工诱导产卵,未受精卵取自产卵虾体内,受精卵分期分批取样,固定。供试样品经PBS漂洗,AO、FITC和PI染色,LSCM观察、图像处理。刚产出的、未活化卵子形态不规则,皮层内富含皮质棒和皮层颗粒(Fig1)。不论受精与否,产入海水的卵子都能被激活并恢复减数分裂。活化后的卵子释放出皮层囊泡内的皮质棒(Figs2&3)。释放出的皮质棒转变为均质的胶质层(Figs4&5)。随后,皮层颗粒释放并在卵子表面转化为均质化的孵化膜。卵子开始举起,与孵化膜之间形成卵周隙。卵周隙内具有絮状物质(Figs6,7&8)。卵子产出后笫8~10min,经过减数分裂,第一极体排放,并随着孵化膜的举起而被推向卵外(Fig5)。笫20min,第二极体排放,并由卵子表面到达孵化膜的内缘(Fig6)。在20℃水温条件下,受精卵产入海水中60 相似文献