小鼠mP24基因的原核表达及多抗制备

目的：本研究是为后续实验中深入研究小鼠mP24基因的功能及活性提供mP24多克隆抗体。方法：mP24是小鼠中新发现的新基因,通过构建了pET-28a（＋）/mP24原核表达质粒,转化入大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导宿主细菌表达融合蛋白。经过SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白能以可溶性蛋白形式存在。利用镍柱纯化融合蛋白,免疫新西兰兔,制备mP24多抗。结果：Western Blot结果显示,制备的抗小鼠mP24多克隆抗体具有较高的特异性。ELISA实验检测,该多抗对免疫抗原的效价高达1：9000,具有较高的效价。结论：本实验成功制备了mP24的多克隆抗体,为进一步开展mP24基因功能的研究奠定了基础。     

RNA研究的前沿与挑战

核糖核酸(RNA)是生命科学“中心法则”的三大核心分子之一, RNA调控细胞生命活动规律的机制研究已成为生命科学发展最为迅速的前沿领域之一,是未来生物技术革命的重要驱动力。加强RNA领域原创理论、原创技术和转化应用的突破,促进学科交叉,符合当前生物医学与农业科学发展的需求,也是实现高水平科技自立自强、促进经济社会发展和确保国家安全的必要之举。该文基于国家自然科学基金委员会(简称自然科学基金委)第337期双清论坛“RNA研究的前沿与挑战”研讨,结合RNA研究领域的历史、RNA研究在生物技术革命中的重要地位,阐述了RNA研究的科学价值与战略意义、中国RNA研究的主要进展和重要成果,提出了自然科学基金委未来5～10年在该领域亟需解决的关键科学问题与部署的研究方向,并对促进RNA基础研究与应用基础研究的变革性发展提出了政策建议。     

面向科技前沿 开拓引领方向——“细胞器互作网络及其功能”重大研究计划阶段总结

国家自然科学基金重大研究计划“细胞器互作网络及其功能”研究自2017年启动实施以来,始终坚持“有限目标、稳定支持”,取得了一系列阶段性成果,有力推动了我国细胞器互作领域基础研究。截至2021年底,中期评估工作顺利通过。该文概述了该计划实施以来所取得的突破性进展及其重要学术影响,并介绍了该计划结合前期研究进展和管理实践,以“集成升华、跨越发展”为指导思想对未来集成方向的布局,供有关研究人员参考。     

应用RNAi技术沉默大转录本基因LRP1B

低密度脂蛋白受体相关蛋白1B(Lipoprotein receptor-related protein 1 B, LRP1B)是脂蛋白受体家族庞大受体亚群的成员之一, LRP1B基因编码一个长达16.5 kb的大转录本。由于LRP1B的转录产物过大限制了其功能研究。为研究LRP1B基因与肿瘤转移的相关性, 文章应用RNAi技术特异地封闭了LRP1B基因的表达。在设计siRNA过程中, 根据高效siRNA序列特征和靶序列处的mRNA二级结构特点, 对LRP1B基因多达1 100个的siRNA候选靶序列进行双重评价, 最终在基因转录本的不同位置选取了6个siRNA靶位点。针对这些靶位点, 文章构建了6个表达shRNA的pSilencer4.1重组体, 稳定转染HEK 293细胞并采用半定量RT-PCR检测各表达载体的沉默效果。结果表明, 所构建的6个shRNA-pSilencer4.1重组体中有5个对LRP1B基因形成了有效沉默(＞50%), 并得到了多个完全封闭LRP1B基因表达的HEK 293细胞单克隆。