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用 Northern印迹证实在 He La细胞中有 t TG的表达 ,且这种表达受 TNF-α的上调 .构建t TG反义真核表达质粒并转染 He La细胞 ,用 G41 8抗性筛选稳定表达的转染细胞 ,并用 Northern印迹和 t TG活性测定进一步分析反义 t TG的转录 .用结晶紫及 MTT法证实阳性细胞克隆获得了对 TNF- α的抗性 ,而转染表达载体 pc DNA3的细胞仍对 TNF- α敏感 .结果表明降低 t TG活性能使细胞对 TNF- α诱发的细胞凋亡敏感性降低 相似文献
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纤溶酶原激活剂抑制物2型的结构与功能 总被引:3,自引:0,他引:3
田昱 《国外医学:分子生物学分册》1997,19(1):31-33
纤溶酶原激活剂抑制物2型具纤溶抑制活性,是尿激酶特异的抑缺点蛾。uPA在肿瘤浸润过程中起了十分关键的作用,PAI-2亦因此成为当今研究的热点。 相似文献
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为研究和比较纤深酶原激活剂抑制物2型(plasminogen activaor inhibitor type 2,PAI-2)及其突变体的生物化学性质,用PCR、体外定点突变技术构建PAI-2突变体PAI-2CD和PAI-2QcDNA,将突变体cDNA与原核表达载体重组并转化怕杆菌。经诱导表达,SDS-PAGE证实表达出相应蛋白质,均占全菌总蛋白的14%。Wetern印迹、溶圈抑制及纤维蛋白翻转板 相似文献
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抗菌肽ABP3基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 总被引:7,自引:0,他引:7
用化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽ABP3基因片段,合成片段拼接后,与pUC19重组,经限制酶片段分析与核苷酸序列分析,获得抗菌肽ABP3基因。ABP3基因与表达载体pBIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达,重组ABP3以分泌型表达,具抗菌活性,且符合ABP3的抗菌特性。 相似文献
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将纤深酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)突变体PAI-2CD和PAI-2QcDNA与真核表达载体pcDNA3重组,构建真核表达质粒并转染HeLa细胞,经G418筛选,Northern迷鉴定和ELISA检测,筛选出稳定表达PAI-2CD和PAI-2Q的阳性细胞株。ELISA结果表明PAI-2突变蛋白质在转染细胞中的表达量与相应野生型PAI-2在阳性细胞克隆中的表达量基本相近,PAI-2及其突变体在理 相似文献
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化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽ABP3基因片段,合成片段拼接后,与pUC19重组,经限制酶片段分析与核苷酸序列分析,获得抗菌肽ABP3基因。ABP3基因与表达载体pPIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达,重组ABP3以分泌型表达,具抗菌活性,且符合ABP3的抗菌特性。 相似文献
7.
用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)基因,与pPUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2基因.PAI-2基因与表达载体pPIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选和PCR扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组PAI-2以分泌型表达,占分泌总蛋白的30%,具PAI-2抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗SDS复合物,具抑制纤溶的活性(91.4AIU/ml).对培养条件也进行了探讨. 相似文献
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将编码379个氨基酸残基的PAI-1cDNA插入到含AOX1启动子和PHO1分泌信号肽序列的甲醇营养型酵母载体中,构建成表达质粒pYIS-1.表达质粒转化P.pastoris甲醇营养型酵母细胞,筛选His+Mut-表型的转化子,经低密度摇瓶培养,1%甲醇诱导表达7d后,培液经SDS-PAGE分析,PAI-1生物活性测定和Westernblot证实表达出分子量为43~51kD的4条PAI-1条带.表达的PAI-1能有效地分泌到培液中,占培液总蛋白的26%左右,达4mg/L培液;其比活性为1.16×104AU/mg.不同分子量PAI-1可能与其糖基化程度不同有关 相似文献
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用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)cDNA,与pUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2cDNA.PAI-2cDNA与原核表达载体重组,构建原核表达质粒并转化大肠杆菌.经温度诱导表达,重组PAI-2占全菌总蛋白的14%,以可溶性形式存在,具纤溶抑制活性.工程菌发酵、压榨后,用硫酸铵分级沉淀,沉淀物经分子筛、离子交换和疏水性色谱的分离,每升菌液可获得约30mg纯度达90%的蛋白质,比活性为11866AIU/mg蛋白质,得率为19.2%. 相似文献
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