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卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (lecithincholesterolacyltransferase,LCAT)是产生血浆中大部分胆固醇酯 (CE)的主要酶 ,并且是胆固醇逆转运 (reversecholesteroltransfer,RCT)中的一个关键因子。将含有人apoA I和 /或LCATcDNA的rAAVAIL/rAAVL表达载体与 pDG质粒经磷酸钙共沉淀法转导入 2 93T细胞中 ,包装为重组腺辅助病毒 (rAAV) ;以Iodixanol密度梯度离心 ,继以肝素亲和层析等方法分离、纯化及浓缩rAAV ;斑点杂交鉴定制备的rAAV颗粒数达 7× 10 14 个 /L(rAAVAIL)和 1× 10 14 个 /L(rAAVL)。以rAAVAIL/rAAVL转染小鼠肌源性细胞C2C12 ,经ELISA、Western印迹和 [3 H] 胆固醇标记底物的放射化学方法结果分别表明 ,apoA I、LCAT在转染细胞中持续 30天表达 ;分化为多核的肌管细胞后 ,仍保持这种表达能力。PCR结果表明 ,目的基因已整合入细胞基因组。以rAAV为载体 ,能有效介导人LCAT、apoA I基因在肌源性细胞中表达 ,并分泌至细胞外  相似文献   
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