不同离心力对小鼠囊胚胞外微囊泡miRNA组分的影响

胞外微囊泡(microvesicle,MV)通讯与微囊泡内容物组成相关。不同制备方法所获得的胞外囊泡具有差异性。该文分析了不同离心力对小鼠囊胚胞外微囊泡MV大小和miRNA组分的影响。分别以12 000×g、50 000×g、100 000×g超速离心的方法分离纯化小鼠d 3.5囊胚细胞胞外MV;粒度仪检测MV的粒径范围;荧光定量PCR进行MV的miRNA基因表达检测。结果显示,12 000×g离心力所制备的MV平均粒径是(444.5±258.7)nm,含有333个miRNA;50 000×g的MV平均粒径是(237.0±178.0)nm,含有339个miRNA;100 000×g MV平均粒径是(164.8±56.5)nm,含有335个miRNA。微囊泡的尺度和miRNA组分与离心力相关,不同离心力所获得的MV所含的miRNA种类及相同miRNA的丰度有差异。因此,不同离心力影响所制备小鼠囊胚MV大小和miRNA的组分。     

siRNA联合沉默MMP-9和FAK基因对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭和迁移的影响

目的： 观察双基因联合干扰MMP-9和FAK对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10体外侵袭、迁移能力的影响。方法：分别构建pGV102-MMP9-siRNA,pGV102-FAK-siRNA重组质粒载体,脂质体^TM2000介导转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞,实验分为空白对照组、Anti-MMP-9组,Anti-FAK组、Anti-MMP-9 &FAK组、阴性对照组。经G418筛选GFP+克隆,流式细胞仪分析阳性率,激光共聚焦观察转染后细胞形态,半定量RT-PCR检测各组B16F10细胞MMP-9和FAK基因的mRNA转录水平,Transwell侵袭、迁移实验测定各组B16F10细胞体外侵袭、迁移能力。结果： 经G418筛选,3个转染组阳性率分别为92.41±1.64%,95.72±0.21%,91.52±0.11%,且转染后细胞形态良好;与空白对照组相比,3个转染组的MMP-9,FAK mRNA转录水平下降明显（P<0.01）,迁移、侵袭能力明显降低（P<0.01）,但Anti-MMP-9 &FAK组细胞侵袭迁移能力显著低于Anti-MMP-9 组和Anti-FAK组（P<0.01）。结论： 相比单独沉默MMP-9 或FAK,联合沉默MMP-9 和FAK可明显降低小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移、侵袭能力。