圈养条件下仔狍的生长与发育

2003 年4 月至2004 年10 月对12 只狍东北亚种雌性生产的16 只仔狍进行了生长发育观察。记录仔狍出生日期,观察生长过程的毛色变化,定期检查牙齿生长状况,测定体尺和体重,所得数据采用SPSS13. 0 软件处理,绘制生长曲线并建立体长与体重的拟合曲线方程。结果表明,圈养条件下仔狍出生主要集中在5 月中旬至6
月中旬,出生时毛色呈暗棕黄色,身体两侧分布不规则的白斑,翌年换毛后白斑消失;出生仔狍的齿式为(0 03 0 /4 0 3 0)×2 = 20,成年狍的齿式为(0 1 3 3/4 0 3 3)×2 = 34,乳齿6 ～7 月龄开始脱换,8 ～9 月龄完成,脱换的顺序为中央切齿→两侧切齿→隅齿;(上、下颌)后臼齿的第一后臼齿2 月龄萌发、3 ～ 4 月龄生长完成,第
二后臼齿6 ～ 7 月龄萌发,8 ～9 月龄生长完成,第三后臼齿12 ～ 13 月龄萌发,14 ～ 15 月龄生长完成;乳齿的前臼齿从12 月龄开始脱换,14 月龄完成,脱换的顺序是上颌第一前臼齿和下颌第三前臼齿→上、下颌第二前臼齿→上颌第三前臼齿和下颌第一前臼齿;仔狍体尺增长率顺序为体长> 臀高> 肩高> 胸围> 腰围。仔狍体长与体重的拟合曲线方程是Y = 63.1084 - 0.0070x + 1.1e ^{- 6} x² - 3e^{- 11} x³ ,生长发育过程可分为生长快速期、生长缓慢期和雌雄狍生长差异期3 个阶段。     

圈养条件下狍发情配种模式的研究

通过在吉林农业科技学院左家校区动物实习基地进行试验,研究了野生狍(中国亚种)在人工驯化饲养条件下的发情配种模式.研究结果表明:狍属于短日照繁殖动物,发情和配种在秋季进行,每年有一个发情周期,性成熟是14±2月龄;雄狍在整个发情配种期始终保持兴奋状态,随时可以与达到发情旺期的雌狍进行交配,发情的雌狍外观没有明显表现,当对雄狍表现好感、主动亲近雄狍时,就是交配的最好时机;狍配种方式采用单雄群雌的同期复配方式,性别比例为雄性狍∶雌性狍=1∶4.     

梅花鹿S100A4 基因的克隆及融合蛋白的表达

为了研究梅花鹿S100A4 (S100 calcium binding protein A4)基因在鹿茸生长过程中的作用。用RT-PCR 法
从生茸骨膜细胞总RNA 中克隆了梅花鹿S100A4 基因,在NCBI 中对基因序列进行比对;将完整的基因序列与逆
转录病毒表达载体pLEGFP-C1 重组,获得了重组质粒pLEGFP-S100;用脂质体法将pLEGFP-S100 与pVSV-G (被
膜载体)共转染包装细胞GP2 - 293,获得重组病毒上清液,感染角柄骨膜细胞后逆转录病毒携带的基因进入宿
主细胞。结果显示:S100A4 基因是一个相对保守的基因,与多个物种的匹配度达到90% ;重组逆转录病毒载体
pLEGFP-S100 可以形成重组逆转录病毒粒子,将S100A4 基因导入靶细胞,并表达S100A4 与GFP (Green fluorescent
protein)的融合蛋白。     

水貂IGF-Ⅰ基因的克隆、序列分析及原核表达分析

获得水貂IGF-Ⅰ基因的cDNA序列,实现IGF-Ⅰ基因在大肠杆菌中的融合表达。利用RT-PCR技术从水貂肝脏组织扩增出水貂胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）的编码区序列。此序列编码153个氨基酸的前体蛋白质。同源性分析表明IGF-Ⅰ的核苷酸和氨基酸序列与已报道的金丝猴、小熊猫、大熊猫、东北虎、马等哺乳动物的序列高度同源（＞90%）。对位比较发现水貂的信号肽序列具有氨基酸特异性,这些氨基酸是否影响水貂IGF-Ⅰ分子的构型、进而影响功能则需要进一步的研究。将构建的重组表达载体pGEX-6P-1-IGF-Ⅰ转入大肠杆菌BL21进行原核表达,得到高效融合表达,融合蛋白分子量约为34 KD。Western-blotting杂交证实了表达蛋白的抗原活性。本研究成功克隆、表达了水貂IGF-Ⅰ基因,分析和预测了其结构和功能,为进一步的生物活性研究打下基础。     

梅花鹿Fibulin 5 编码区cDNA的克隆及功能研究

为研究梅花鹿扣针蛋白5(Fibulin5, FBLN5)在鹿茸再生过程中的作用,本研究通过RT-PCR获得了梅花鹿FBLN5的cDNA编码区,并对其进行生物信息学分析。同时利用RNA干扰技术（RNA interference, RNAi）下调了梅花鹿角柄骨膜致敏区（Potentiated pedicle periosteum, PPP）细胞中FBLN5基因表达,并研究了基因表达下调后PPP细胞条件培养液对HUVEC细胞增殖的影响。结果显示：(1) 梅花鹿FBLN5 cDNA编码区长1347 bp,编码448个氨基酸;(2) 生物信息学软件分析显示,梅花鹿FBLN5蛋白含有一个跨膜区,一段23个氨基酸的信号肽序列,vWA_Matrilin、cEGF和EGF_CA等重要的功能结构域;(3) 构建了梅花鹿FBLN5基因的RNAi重组质粒并获得了一条能有效下调目的基因效率达88.72%的靶序列pLVTHM-FBLN2,MTT结果显示PPP细胞FBLN5基因表达量下调后,所获细胞条件培养液可显著促HUVEC细胞增殖,推测FBLN5可能参与了鹿茸再生过程中的血管生成及稳态维持等过程。