美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术（RPA）检测方法的建立及其应用

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）在我国出现了多种基因亚型毒株混合流行和重组的复杂变化,其引起的猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveand Respiratory Syndrome,PRRS）已成为危害程度仅次于非洲猪瘟的重要疫病。为建立一种快速而敏感性高的美洲型PRRSV检测方法,本研究分析了国内美洲型全基因组序列,利用重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）,设计合成特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法,通过特异性、敏感性、重复性试验及田间样品的比对检测,评价该方法的检测能力,并测定和分析了田间阳性样品的ORF5基因序列。结果显示,该方法在42℃、20 min内即可完成检测,最低检测美洲型PRRSV载量为50拷贝/μL,且与欧洲型PRRSV、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应,特...