腹泻型IBS患者小肠细菌过度生长和抗菌素的影响

目的观察腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者乳果糖氢呼气试验(LHBT)的阳性率、以及短期抗菌素治疗的疗效。方法 89例符合罗马Ⅲ标准的IBS-D患者接受LHBT检测,分析LHBT结果与肠易激综合征(IBS)症状的相关性;16例LHBT阳性IBS-D患者接受"替硝唑或司帕沙星"治疗1周,观察LHBT阴转率及其与症状改善的关系。结果 89例IBS-D患者中,46例(51.7%)LHBT阳性。LHBT阳性组与LHBT阴性组IBS患者在腹痛程度和频率、腹胀程度和频率的差异有统计学意义(P0.05)。16例LHBT阳性的IBS-D患者经1周抗菌素治疗后10例(62.5%)LHBT阴转,IBS症状改善率(Y)与H2呼出量减少率(X)存在正相关关系(回归方程Y=31.3+0.34X,r=0.61,P=0.03)。结论 51.7%IBS-D患者存在小肠细菌过生长(SIBO),SIBO与IBS-D患者的腹痛、腹胀症状有关;短程抗菌素治疗后可以使IBS-D的部分症状获得缓解。     

Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用和机制

探究Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用以及Akkermansia muciniphila通过影响肠道黏膜屏障延缓结肠炎癌变的机制。

C57BL/C小鼠共30只,分为对照组、结肠炎相关结肠癌组、结肠炎相关结肠癌+AKK组,每组10只,在建模结束后采用断头法处死小鼠,HE染色检测结肠病理结构,计算成瘤率。采用ELISA法检测3组小鼠结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫荧光双染法检测3组小鼠ZO-1和E-cadherin的表达情况,免疫组化法检测3组小鼠结肠组织Occludin-1、N-cadherin、GPCR41、GPCR43、Bcl-2、 Bax等蛋白的水平,GC-MS法检测3组小鼠短链脂肪酸的水平。

HE发现结肠炎相关结肠癌组小鼠的结肠组织炎症浸润,肠腺水肿,存在不同程度的异型增生,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的结肠水肿和出血减轻,肠腺结构清晰。结肠炎相关结肠癌组中小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平（pg/mL）（9.12±0.36、6.36±0.42、45.20±3.63）较对照组（3.80±0.38、0.06±0.89、2.10±0.14）升高（Tamhane’s T2分别为0.001、2.549、12.831,均P＜0.05）,经Akkermansia muciniphila灌胃后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平（3.92±0.19、3.54±1.28、18.20±8.47）下降（Tamhane’s T2分别为6.553、2.414、5.743,均P＜0.05）。免疫荧光双染法显示ZO-1 和 E-cadherin主要定位在结肠柱状上皮和肠腺,结肠炎相关结肠癌组ZO-1和E-cadherin的表达（ng/mL）（0.04±0.01、0.34±0.55）比对照组（0.10±0.18、0.48±0.13）降低（Tamhane’s T2分别为0.681、4.379,均P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila处理后显著上调小鼠结肠的ZO-1 和 E-cadherin的表达（0.08±0.05、1.08±0.28）（Tamhane’s T2分别为7.059、5.873,均P＜0.05）。免疫组化显示结肠炎相关结肠癌组Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（ng/mL）（0.36±0.06、0.48±0.13、0.38±0.13、0.34±0.55）较对照组（1.08±0.08、0.74±0.06、0.48±0.13、1.64±0.11）减低（LSD-t分别为2.369、0.304、8.119、2.298,均P＜0.05）,Bax表达（ng/mL）（1.34±0.27）较对照组（0.48±0.13）增加（LSD-t为7.727,P＜0.05）,与结肠炎相关结肠癌组相比,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（0.84±0.06、0.60±0.19、1.08±0.08、1.08±0.28）上调（LSD-t分别为1.153、4.111、9.472、5.873,均P＜0.05）,Bax表达（0.34±0.58）下调（LSD-t为8.785,P＜0.05）。短链脂肪酸检测结果显示,结肠炎相关结肠癌组丙酸丙酯水平（μg/mg）（0.000066±0.000025）较对照组（0.000244±0.000035）下降（LSD-t为7.448,P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila干预后,结肠炎相关结肠癌+AKK组的丙酸丙酯水平（0.000276±0.000049）上升（LSD-t为8.779,P＜0.05）,3组中戊酸丙酯、异己酸丙酯、己酸丙酯的水平差异均无统计学意义。

Akkermansia muciniphila可降低结肠炎相关结肠癌小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能通过短链脂肪酸介导GPCR调控ZO-1、E-cadherin、Occludin-1等结肠紧密连接蛋白的表达,增强结肠的黏膜屏障,从而降低结肠炎相关癌变的发展进程。

     

粪菌移植对小鼠实验性结肠炎 TLR4信号通路及肠黏膜屏障的影响

目的 探讨粪菌移植(FMT)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜屏障的影响及可能机制。 方法 小鼠饮用2.0%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建小鼠UC模型;50只成年雄性C57BL/6J小鼠,随机留取10只取粪便(这10只不参与后续的实验),其余40只称重、编号,随机分为空白对照组(Con组)、DSS模型对照组(Model组)、美沙拉嗪组(Model+5ASA组)和粪菌液组(Model+FMT组),每组10只,Con组和Model组均给予0.9% NaCl溶液灌肠,给药组分别给予美沙拉嗪、粪便滤液灌肠;评估疾病活动指数(DAI)、各组结肠组织病理情况,用透射电镜检测各组小鼠的结肠黏膜上皮细胞结构的变化情况,ELISA检测各组血清内毒素、炎症因子TNFα水平变化,免疫组化法检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)及核因子κB(NFκB)的表达变化,Western blot检测各组ZO1蛋白表达。 结果 与Model组相比,粪菌移植明显改善小鼠的DAI指数和结肠组织的病理损伤,结肠上皮细胞间隙增宽程度减轻,腺上皮细胞间连接较紧密,结肠黏膜上皮细胞微绒毛完整,排列整齐,内毒素、TNFα的含量明显下降,TLR4及NFκB在结肠组织的表达明显下降,ZO1蛋白表达明显升高,促进结肠黏膜屏障的修复,差异具有统计学意义(t=7.954 3,P结论 FMT可减少内毒素及炎症因子的产生,改善结肠炎症,TLR4NFκB信号通路可能是FMT修复结肠黏膜屏障功能的机制之一。     

幽门螺杆菌感染对DSS结肠炎小鼠 Th17/Treg细胞亚群的影响

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的影响。 方法 80只雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组(CON组,n=20)和实验组(n=60),实验组制作DSS诱导UC模型,然后分组建立成为结肠炎组(CLi组)、H.pylori持续感染的结肠炎组(Hp组)和H.pylori根除的结肠炎组(Hp Era组),每组20小鼠。实验过程中观察小鼠一般情况和疾病活动指数(DAI);在第25天、45天时处死动物,分离外周血和结肠组织中单个核细胞,流式细胞仪检测其Th17/Treg细胞亚群变化。 结果 CLi组、Hp组、Hp Era组小鼠DAI评分显著高于CON组(均P结论 H.pylori感染使DSS结肠炎小鼠UC的Th17亚群比例降低、Foxp3+Treg细胞比例增加,这种变化似乎对DSS诱导的结肠炎具有保护作用。     

Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用和机制CSCD

目的 探究Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用以及Akkermansia muciniphila通过影响肠道黏膜屏障延缓结肠炎癌变的机制。方法 C57BL/C小鼠共30只,分为对照组、结肠炎相关结肠癌组、结肠炎相关结肠癌+AKK组,每组10只,在建模结束后采用断头法处死小鼠,HE染色检测结肠病理结构,计算成瘤率。采用ELISA法检测3组小鼠结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫荧光双染法检测3组小鼠ZO-1和E-cadherin的表达情况,免疫组化法检测3组小鼠结肠组织Occludin-1、 N-cadherin、GPCR41、GPCR43、Bcl-2、 Bax等蛋白的水平,GC-MS法检测3组小鼠短链脂肪酸的水平。结果 HE发现结肠炎相关结肠癌组小鼠的结肠组织炎症浸润,肠腺水肿,存在不同程度的异型增生,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的结肠水肿和出血减轻,肠腺结构清晰。结肠炎相关结肠癌组中小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平(pg/mL)(9.12±0.36、 6.36±0.42、 45.20±3.63)较对照组(3.80±0.38、 0.06±0.89、 2.10±0.14)升高(Tamhane’s T2分别为0.001、2.549、12.831,均P<0.05),经Akkermansia muciniphila灌胃后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平(3.92±0.19、3.54±1.28、18.20±8.47)下降(Tamhane’s T2分别为6.553、2.414、5.743,均P<0.05)。免疫荧光双染法显示ZO-1和E-cadherin主要定位在结肠柱状上皮和肠腺,结肠炎相关结肠癌组ZO-1和Ecadherin的表达(ng/mL)(0.04±0.01、0.34±0.55)比对照组(0.10±0.18、0.48±0.13)降低(Tamhane’s T2分别为0.681、4.379,均P<0.05),而经Akkermansia muciniphila处理后显著上调小鼠结肠的ZO-1和E-cadherin的表达(0.08±0.05、1.08±0.28)(Tamhane’s T2分别为7.059、5.873,均P<0.05)。免疫组化显示结肠炎相关结肠癌组Occludin-1、 GPCR41、 GPCR43、 Bcl-2表达(ng/mL)(0.36±0.06、 0.48±0.13、 0.38±0.13、 0.34±0.55)较对照组(1.08±0.08、 0.74±0.06、 0.48±0.13、 1.64±0.11)减低(LSD-t分别为2.369、 0.304、 8.119、 2.298,均P<0.05),Bax表达(ng/mL)(1.34±0.27)较对照组(0.48±0.13)增加(LSD-t为7.727,P<0.05),与结肠炎相关结肠癌组相比,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达(0.84±0.06、0.60±0.19、 1.08±0.08、 1.08±0.28)上调(LSD-t分别为1.153、 4.111、 9.472、 5.873,均P<0.05), Bax表达(0.34±0.58)下调(LSD-t为8.785,P<0.05)。短链脂肪酸检测结果显示,结肠炎相关结肠癌组丙酸丙酯水平(μg/mg)(0.000 066±0.000 025)较对照组(0.000 244±0.000 035)下降(LSD-t为7.448, P<0.05),而经Akkermansia muciniphila干预后,结肠炎相关结肠癌+AKK组的丙酸丙酯水平(0.000 276±0.000 049)上升(LSD-t为8.779, P<0.05), 3组中戊酸丙酯、异己酸丙酯、己酸丙酯的水平差异均无统计学意义。结论Akkermansia muciniphila可降低结肠炎相关结肠癌小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能通过短链脂肪酸介导GPCR调控ZO-1、E-cadherin、Occludin-1等结肠紧密连接蛋白的表达,增强结肠的黏膜屏障,从而降低结肠炎相关癌变的发展进程。     

溃疡性结肠炎小鼠肠道通透性改变与TNF-α及NF-κB P65的关系

目的：采用2.5%葡聚糖硫酸钠（DSS）定量灌胃诱导小鼠溃疡性结肠炎（UC）,观察小鼠结肠通透性改变与肿瘤坏死因子α（TNF-α）及NF-κB p65的关系。方法：48只ICR小鼠随机分为2组（n=24）：对照组和模型组。模型组小鼠给予2.5% DSS定量灌胃诱发小鼠急性UC,对照组小鼠予同体积的蒸馏水灌胃代替。记录两组小鼠疾病活动指数（DAI）,9 d后测定两组小鼠结肠组织病理学评分、结肠通透性、TNF-α及NF-κB p65。统计分析DAI、结肠通透性、TNF-α与NF-κB p65之间的相关性。结果：与对照组比较,模型组小鼠DAI、结肠病理学评分、结肠通透性、TNF-α、NF-κB p65均显著增高（P均<0.01）。小鼠DAI增高与结肠通透性密切相关（P均<0.01）,结肠通透性增高与TNF-α、NF-κB p65密切相关（P均<0.01）。结论：与对照组小鼠相比,DSS造模小鼠的结肠通透性显著增高,并与TNF-α、NF-κB p65增高呈正相关。TNF-α、NF-κB p65增高导致结肠通透性增高,进而导致炎症免疫反应过度增强,可能是UC发病的重要环节。     

米曲菌胰酶片对功能性消化不良合并小肠细菌过度生长患者的治疗

目的 了解功能性消化不良（FD）中小肠细菌过度生长（SIBO）的发生率,推测临床预测因子并观察米曲菌胰酶片对FD合并SIBO的疗效。方法 对112例符合罗马Ⅲ标准的FD患者进行第1次LHBT（f-LHBT）,其结果使用Logistic回归分析LHBT阳性的预测因子。26例f-LHBT阳性者随机接受加酶或非加酶治疗,2周后复查LHBT（LHBT-2w）,对LHBT-2w持续阳性者继续加酶治疗2周后再次复查LHBT（LHBT-4w）。比较加酶组与非加酶组间症状改善情况及复查LHBT情况。结果 112例FD中,33例（29.46%）f-LHBT阳性,Logistic回归提示上腹胀程度（OR=1.759,95%CI：1.187~2.609）、恶心程度（OR＝1.634,95%CI：1.029~2.594）是LHBT阳性的独立预测因子。治疗2周后,两组共17例患者（65.38%）出现LHBT-2w阴转,其症状改善率高于LHBT-2w持续阳性组（t=－2.833,P=0.009）。加酶组（n=14）症状改善率为（75.89±21.92）%、非加酶组（n=12）为（53.84±31.39）%,差异有统计学意义（t=2.100,P=0.046）。加酶组LHBT-2w阴转率为71.4%,非加酶组为58.3%,差异无统计学意义（P=0.683）,但加酶组高峰呼气H2浓度减少率显著高于非加酶组（U=－2.315,P=0.021）。7例LHBT-2w持续阳性者经继续加酶治疗2周后复查LHBT-4w,结果4例阴转,3例仍持续阳性,但高峰呼气H2浓度均有所下降。结论 大约29% FD患者会合并SIBO,上腹胀程度及恶心程度是独立预测因子。SIBO转阴后消化不良症状改善,提示FD症状可能与SIBO有关。短期使用米曲菌胰酶片可促进这些患者的症状改善,可能与减少SIBO有关。     

粪菌移植对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜Th1/Th2细胞及其细胞因子表达的影响

目的观察粪菌移植(FMT)对结肠炎小鼠结肠组织内Th1/Th2平衡及其细胞因子的影响。方法用葡聚糖硫酸钠(DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型,共48只雄性C57BL/6小鼠,按3∶2∶1随机分为干预组、对照组和粪便供体组。其中干预组24只小鼠自由饮用2%DSS溶液,第6天时再次称重随机分为3组,每组6只:粪便滤液组(A组)、美沙拉嗪缓释颗粒组(B组)、生理盐水组(C组),并分别灌肠给予粪便滤液(500mg/mL,0.3mL/次)、美沙拉嗪缓释颗粒混悬液(25mg/mL,0.3mL/次)和生理盐水(0.3mL/次),每日2次,连续5d;对照组分为急性结肠炎组(D组)和正常对照组(E组),每组6只,分别自由饮用2%DSS溶液和蒸馏水7d后处死;粪便供体组(F组)正常进食饮水,采集新鲜粪便制作粪便滤液。评估疾病活动指数、脾脏指数、结肠长度和结肠组织病理评分。免疫组化法和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测结肠组织Th1/Th2细胞及细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10)的表达。结果 (1)粪菌移植治疗明显改善结肠挛缩和病理损伤(P0.05),而脾脏指数明显增加(P0.05);(2)粪菌移植使结肠炎小鼠结肠组织的T-bet阳性细胞和Gata-3阳性细胞表达升高,T-bet/Gata-3平衡右移;(3)粪菌移植使结肠炎小鼠结肠组织细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10)水平下降。结论粪菌移植促进结肠炎小鼠的结肠黏膜修复,可能与调节结肠组织Th1/Th2细胞平衡,下调炎症因子,介导Th2免疫修复有关。