排序方式: 共有53条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
目的:研究解决半抗原分子单克隆抗体制备技术路径中遇到的在阳性杂交瘤细胞株筛选时无法排除载体蛋白问交叉反应影响的问题,以半抗原去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)为例。方法:在NE完全抗原免疫小鼠实施细胞融合后,分别包被牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、BSA-NE、OVA-NE等4种不同抗原的酶标板平行检测细胞培养上清液;挑选BSA、OVA检测结果为阴性,BSA-NE、OVA-NE检测结果为阳性的孔内细胞进行克隆化筛选单克隆细胞。结果:本筛选方法可一次性从8板96孔板中筛选到13个符合要求的阳性孔,经3次克隆化后获得6株特异性强的杂交瘤细胞株。结论:本方法避免了载体蛋白间交叉反应对筛选的影响,改进了传统的单一指标筛选方法,筛选效率更高。 相似文献
2.
3.
自身抗体检测蛋白芯片制备条件的优化及初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
选择临床上常用的用于自身免疫性疾病抗体检测所对应的12种抗原, 运用NBT/BCIP显色反应策略, 研制一种可同时检测12种常用自身抗体的蛋白芯片检测系统。应用NBT/BCIP终点检测体系对每一种抗原的点样液、点样浓度、血清稀释度进行优化, 制备出可同时检测12种自身抗体的蛋白芯片, 并通过对678例病人血清和120例非病人血清的检测进行敏感度和特异度评价。优化的点样液为0.1%TBST, 血清稀释度为1:4, 12种抗原的最佳点样浓度分别为: ANA 520 mg/mL, Ro-60/SSa 465 mg/mL, La/SSb 530 mg/mL, Jo-1 530 mg/mL, Scl-70 525 mg/mL, Sm 520 mg/mL, Ro-52/SSa 615 mg/mL, RF 340 mg/mL, CCP 465 mg/mL, u1RNP 410 mg/mL, CENP-B 490 mg/mL, dsDNA 580 mg/mL; 通过对678份阳性血清和120份阴性血清的检测, 该蛋白芯片技术对12种自身抗体检测的敏感度在80%~96.3%之间, 特异度在86.7%~100%之间, 与传统的检测技术有较高的符合率。我们研究的自身抗体检测蛋白芯片技术体系具有快速、方便、高通量、廉价等优势, 易于商业化, 适合不同条件的临床需要。 相似文献
4.
用金霉素溶液处理菠菜离体叶绿体,对循环( PMS)和非循环光合磷酸化( FeCy、MV或BQ DBMIB)均可表现出促进作用,表明它对两个能量保存部位都有促进作用。它能提高磷酸化的偶联程度,增加ADP/O及PC比值。在对光合磷酸化有促进作用的情况下,用两阶段光合磷酸化法测定,它对高能态的积累略有增加或影响不大,但它能显著增加叶绿体的延迟发光。它对叶绿体膜上Mg~(2 )-ATP_(ase)及偶联因子Ca~(2 )-ATP_(ase)活力有抑制。金霉素溶液的荧光强度可被加入偶联因子所提高,这些都表明金霉素至少有一个作用部位与偶联因子有关。文中对它能促进光合磷酸化作用的机理进行了讨论。 相似文献
5.
在光照条件下,叶绿体悬浮液的pH值向碱性方向移动,这是由于叶绿体的质子吸收。在叶绿体光合磷酸化机理的研究中,质子吸收现象被解释为光合电子传递链的电子流引起叶绿体膜外的氢离子向膜内位移,致使叶绿体悬浮液的pH值上升。一旦光 相似文献
6.
王国强 《分子细胞生物学报》1989,(2)
叶肉组织在光照绿化期间,有关光合能量转换系统的结构形成和功能发生之间的关系早已为人注意。七十年代末,提出叶绿体偶联因子复合物概念后,这种复合物的分离纯化和亚单位结构功能的研究甚为活跃,但在叶肉组织绿化过程中,这种复合物的亚单位和功能发生之间的情况,尚未见有人报告。我们利用控制光照时间培育了绿苗、黄化绿苗和黄化苗,制备出各自的胞质体,从中分离和部分纯化出它们的偶联因子复合物,比较了它们的异同。一、豌豆叶绿体和黄化叶绿体的光合磷酸化和交换反应活性比较豌豆种籽萌芽后经人工光照(每日光照16小时,黑暗8小时)两天后,进行黑暗处理六天,从这种黄化绿苗提出黄化叶绿体,对照则是正常绿苗所制备的叶绿体。两种胞质体的光 相似文献
7.
醋酸酐处理叶绿体导致与偶联因子有关的部分反应不可逆的失活,这些反应包括偶联的电子传递、光合磷酸化、膜上腺三磷酶活性、~(32)P?ATP交换和质子吸收。低浓度醋酸酐处理叶绿体,只抑制偶联的电子传递而不影响基础电子传递,表明能量转换的偶联机构对醋酸酐的化学作用更为敏感。膜上偶联因子在合成、水解和交换腺三磷的能力上,均因醋酸酐的作用而减弱。偶联因子中具有这些能力的活性部位可能就是醋酸酐的作用靶子。利用在不同pH的反应介质中测最大反应速度而求出参与酶活性中心的氨基酸pK估计值的方法,认为醋酸酐可能修饰了膜上偶联因子活性部位的氨基残基。 相似文献
8.
豌豆叶绿体经焦磷酸钠盐溶液洗涤,并以加蔗糖的Tris—Tricine缓冲液作分离介质,其抽提液通过 DEAE—Sephadex A_59柱层析,可得较高纯度的腺三磷酶制剂。经免疫沉淀反应、需镁腺三磷酶活和 SDS—聚丙烯酸胺凝胶电泳证明,这种豌豆叶绿体偶联因子腺三磷酶具有五种蛋白带,与菠菜叶绿体偶联因子腺三磷酶的五种亚单位(α,β,γ,δ和ε亚单位)具有相近的分子量,但两者的α和β亚单位大小有异。 相似文献
9.
叶绿体类囊体膜蛋白质磷酸酯酶 总被引:3,自引:0,他引:3
概述了植物蛋白质磷酸酯酶的研究现状,重点介绍了叶绿体类囊体膜蛋白质磷酸酯酶的分离、纯化、定位、影响酶活力的因子,以及酸在类囊体膜蛋白质磷酸化调节中表现出的多样性。 相似文献
10.