天蚕素A-蜂毒素杂合肽用pBV220载体的表达、纯化和活性测定

为提高抗菌肽的表达,在抗菌肽的N端融合了1段酸性小肽以中和表达产物对宿主的毒性;并将融合肽基因同向串连成多拷贝,在大肠杆菌中获得了较高的表达。用化学合成法分别合成了编码天蚕素A(1-8)-蜂毒素(1-10)杂合肽和酸性小肽的DNA片段,首先将其拼接成融合肽的完整基因,然后通过前后接头将融合肽基因连接成两侧具有EcoRI和SalI酶切位点的同向串连的多拷贝基因。将5份拷贝的基因克隆至pBV220表达载体,转化E.coliDH5α,温度诱导得到表达量为35%的融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式存在,将包涵体溶解,经Ni²⁺-NTA琼脂糖亲和层析获得纯化的融合蛋白。融合蛋白再经CNBr切割和阳离子交换层析,得到纯化的抗菌肽,经蛋白质N端测序确认序列正确。琼脂糖扩散法和液相测定法证明了纯化的抗菌肽具有抗菌活性。     

TRPM7生理病理学功能及其小分子调节剂的发现

TRPM7（transient receptor potential melastatin 7）通道属于TRPM亚家族，是一种具有离子通道结构域和激酶结构域的双功能跨膜蛋白。作为非选择性阳离子通道，TRPM7可通透Ca²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺、Na⁺、K⁺等和其他微量金属离子。TRPM7在人体各组织广泛表达，参与Mg²⁺的稳态调控、细胞增殖、分化、黏附和迁移等生理过程。临床上，TRPM7功能紊乱与神经退行性疾病、中风、癌症等多种疾病关系密切。本文主要综述TRPM7通道在生理、病理及小分子调节剂方面的研究进展，为相关疾病的药物开发提供新的思路。