东北设施黑土土壤微生物总DNA提取方法探讨

目的:找到一种适合东北设施高腐殖含量黑土土壤微生物总DNA简单易行的提取方法。方法:采用5种不同的DNA提取方法进行土壤总DNA提取。结果:5种提取方法的DNA产量在6.88～29.71μg/g,OD260/OD280值为1.03～1.27,OD260/OD230值为0.65～0.88,经纯化后均可进行PCR扩增。但经改进的方法 E提取DNA产量最高,纯度最好。结论:方法 E—加入TENP和PBS缓冲液预处理的提取方法是一种适宜东北设施黑土土壤微生物总DNA批量提取简单易行的方法。     

噬菌体展示筛选得到一种能修饰nNOS活性的多肽

多种疾病的病理过程涉及脑型一氧化氮合酶（nNOS）的活性改变。为了寻找特异的nNOS调控分子,将nNOS的钙调素结合区在大肠杆菌（E. coli）中表达,表达蛋白经纯化后作为靶分子用于12肽噬菌体展示库筛选,得到10个对nNOS具有特异性抑制作用的克隆。DNA测序显示一个氨基酸共同序列：KPHHHPMPPQVS,将其命名为NPI。合成的NPI多肽对从小鼠脑新鲜制备的nNOS具有抑制作用（抑制率为25%-35%）,而对失去部分活性的nNOS却表现为剂量依赖的恢复活性效应。本文结果提出一种研发nNOS调节药物的新方法-噬菌体展示技术,同时NPI对nNOS活性的双向调节功能也为认识机体自身nNOS活性的调控过程提供新的启示。