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NK4蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂。为规模化生产NK4蛋白,将NK4基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4,并转化大肠杆菌Rosseta(DE3)。转化菌经IPTG诱导后以包涵体形式大量表达重组蛋白,占菌体总蛋白的42%。包涵体用盐酸胍溶解后经Ni NTA树脂亲和层析纯化,蛋白纯度约为95%,经Western blot证实为NK4蛋白。纯化的重组蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙,并诱导其凋亡,证实制备的NK4蛋白具有生物活性。NK4蛋白的成功制备将有助于NK4相关功能的深入研究。 相似文献
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探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后,拮抗足叶乙甙(VP-16)诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞:未转染Raji细胞、空载体pVITR02-mcs转染细胞和HGF基因转染细胞,分成正常对照组和经vP-16处理的药物组。采用Westernblot法验证HGF蛋白的表达:CCK-8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度;通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙(A0)染色、苏木精咿红(HE)染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果显示:Westernblot法验证了HGF蛋白质的表达;CCK.8法显示100μg/mL足叶乙甙可明显抑制Raii细胞增殖;透射电镜下可发现典型的凋亡细胞;流式检测结果表明:给药组与正常组相比,三组细胞的凋亡率明显升高(P〈0.01),提示VP-16具有诱导细胞凋亡的作用:但给药组间:HGF基因转染组凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)和空载体pVITR02.mcs转染组(P〈0.05),提示嬲F基因转染可明显抑制VP-16诱导的Raji细胞的凋亡,AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP-16诱导的细胞凋亡效应。 相似文献
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