层粘连蛋白在Vero细胞分泌物中的免疫电镜定位

本研究采用胶体金间接免疫标记电镜技术证实,Ｖｅｒｏ细胞在微载体培养过程中分泌胶原蛋白纤维．并形成网状结构;Ｖｅｒｏ细胞还分泌层粘连蛋白．与胶原纤维结合,构成细胞外基质;层粘连蛋白分布在基质膜与细胞连接的部位,参与细胞与细胞外基质的粘附。     

微载体上依赖于整合蛋白α2亚基的细胞与细胞外基质的粘附(英文)

Ｖｅｒｏ细胞是肾上皮细胞,合成并分泌层粘连蛋白和ＩＶ型胶原,从而在细胞外形成对细胞生长、迁移等有重要影响的细胞外基质膜。已知影响细胞与细胞外基质相互作用的蛋白质分子是整合蛋白。微载体所提供的三维立体培养条件与细胞在体内的生长、迁移条件相似,为在体外研究体内类似过程提供了很好的模型。通过蛋白质印迹法可以检测到：正常培养条件下,在微载体上培养４８小时,Ｖｅｒｏ细胞表达整合蛋白α２亚基（Ｆｉｇ．１ａ）;如果同时加入层粘连蛋白,α２亚基的表达量显著提高（Ｆｉｇ．１ｂ）。正常培养条件下,培养１０天,Ｖｅｒｏ细胞在微载体上形成密集的多层生长,α２亚基表达量明显高于培养初期（Ｆｉｇ．１ｃ）。间接免疫荧光标记（Ｆｉｇ．２）和免疫电镜观察（Ｆｉｇ．３）证实：在层粘连蛋白作用下,α２亚基大量表达,并定位于细胞“附着斑”位置的细胞膜上。此时,如果再用抗层粘连蛋白抗体处理,可观察到原“附着斑”消失,α２亚基在细胞内呈散布状（Ｆｉｇ．４）。整合蛋白α２亚基的表达和与层粘连蛋白形成的“附着斑”提供了Ｖｅｒｏ细胞在微载体上附着和迁移的基础。可能,不同的细胞外基质可以通过不同的整合蛋白来调节细胞活动。