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丙型肝炎病毒基因组C区、NS3区、NS4区基因的融合、表达及初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
通过PCR技术从HCV全长基因组中扩增并克隆到Core区、NS4区的部分优势表面抗原肽的基因和C33a基因。再将它们以Core\,CC3c\,NS4的顺序和C33c、NS4的顺序分别拼接融合成融合抗原CCN、CN。片段之间以Gly-Gly-Gly-Gly柔性连接肽连接。经核苷酸序列分析表明,拼接点序列正确。将融合抗原CN、CCN基因分别克隆至T7启动子控制下的表达质粒PET24(a)+,PET22(b)+中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可高表达分子量约为43kD、58kD的融合抗原,表达产物以包涵体形式存在。表达产物经Ni2+IDA亲和柱纯化后,并对融合抗原CN、CCN的抗原性做了初步的鉴定。 相似文献
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丙型肝炎病毒CS,NS3 NS4区抗原原融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
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丙型肝炎病毒是与输血有关的非甲非乙肝病毒[1] ;是全世界输血后获得性肝炎的重要病因之一 ,并与急慢性肝炎、肝硬化和肝癌有关。由于主要通过输血的传播 ,会给人民的身体健康尤其输血事业带来极大危害。采用基因工程技术 ,表达含有多段抗原的融合蛋白作为HCV检测试剂的抗原 ,可以简化多种抗原的表达及纯化过程 ,并提高了试剂的均一性[2 ] 。研究表明 ,在HCV的抗原基因中 ,核心蛋白Core、NS3区的C33c抗原、NS4区基因编码的抗原免疫原性最强 ,相应抗体出现早 ,分布广 ,亲和力强。因此 ,我们构建了含有中国人HCV序列的Co… 相似文献
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利用RT-PCR技术成功地从人胎盘组织中克隆了膜联蛋白V的cDNA,测序分析表明,与文献报道的核苷酸序列完全一致,交膜联蛋白V的cDNA克隆进T7启动子控制下的表达质粒pET-24a(+)中,经大肠杆菌BL1(DE3)后,经IPTG诱导可高效表达分子量为36kD的膜联蛋白V蛋白,表达产物以可溶形式存在。表达产物占菌体总蛋白的38%左右。表达产物经肝素亲和层析纯化后具有明显的延长部分凝血活酶时间的作 相似文献
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