人微小纤溶酶原基因的克隆和表达

用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasmingen,mPlg)基因,再与表达载体重组．构造mPlg原核表达质粒并转化大肠杆菌。阳性克隆pSSE-mPlg经温度诱导表达,SDS-PAGE等方法证明表达产物的分子量约为29kDa。占全菌总蛋白的24％左右,并在菌内形成包涵体。经半胱氨酸再氧化法和空气氧化法复性。表达产物r-mPlg经SK作用后显示纤溶活性。同时对蛋白质浓度、复性时间等因素对复性的影响进行了初步探讨。     

人微小纤溶酶基因的克隆和表达

用ＰＣＲ方法扩增人微小纤溶酶原（Ｍｉｃｒｏｐｌａｓｍｉｎｇｅｎ,ｍＰｌｇ）基因,再与表达戴本重组,构造ｍＰｌｇ原核表达质粒并转化大肠杆菌,阳性克隆ｐＳＳＥ－ｍＰｌｇ经温度诱导表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等方法证明表达产物的分子量约为２９ｋＤａ占全菌总蛋白的２４％左右,并在菌内形成包涵体,经半胱氨酸再氧化法和空气氧化法复法,表达产物的ｒ－ｍＰｌｇ经ＳＫ作用后显示纤溶活性。同时对蛋白质浓度,复性时间等因素对     

抗菌肽ABP3基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

用化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽ＡＢＰ３基因片段,合成片段拼接后,与ｐＵＣ１９重组,经限制酶片段分析与核苷酸序列分析,获得抗菌肽ＡＢＰ３基因。ＡＢＰ３基因与表达载体ｐＢＩＣ９重组,构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化ＧＳ１１５宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达,重组ＡＢＰ３以分泌型表达,具抗菌活性,且符合ＡＢＰ３的抗菌特性。     

抗菌肽ABP3基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽ABP3基因片段,合成片段拼接后,与pUC19重组,经限制酶片段分析与核苷酸序列分析,获得抗菌肽ABP3基因。ABP3基因与表达载体pPIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选,阳性克隆用甲醇诱导表达,重组ABP3以分泌型表达,具抗菌活性,且符合ABP3的抗菌特性。     

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在大肠杆菌中的表达和分离纯化

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）ｃＤＮＡ,与ｐＵＣ１８重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ．ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ与原核表达载体重组,构建原核表达质粒并转化大肠杆菌．经温度诱导表达,重组ＰＡＩ－２占全菌总蛋白的１４％,以可溶性形式存在,具纤溶抑制活性．工程菌发酵、压榨后,用硫酸铵分级沉淀,沉淀物经分子筛、离子交换和疏水性色谱的分离,每升菌液可获得约３０ｍｇ纯度达９０％的蛋白质,比活性为１１８６６ＡＩＵ／ｍｇ蛋白质,得率为１９．２％．