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人促红细胞生成素基因的合成及在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
人促红细胞生成素(简称hEPO)是一种能够促进祖红细胞分化发育并进而促进红细胞生成的细胞生长因子,它在临床上可用以治疗某些贫血病人特别是由于慢性肾衰所引起的肾性贫血〔1-3〕.hEPO是一种由166个氨基酸组成的糖基化蛋白质.它的前体还带有27个氨基酸的信号肽〔4-6〕。有两对由Cys7-Cys161和Cys29-Cys33组成的二硫键,其糖基化位点为Ash--24。Ash一38.Asn一83和Ser一126〔7-8〕。由于天然来源hEPO的量极少.因此通过基因工程的手段是当前获得大量hEPO的较好的途径〔9-10〕。我们在前文中曾经报道用单链方法合成天花粉胰蛋白酶抑制荆基因〔11〕以及用单链和PCR相结合来合成绿豆胰蛋白酶抑制荆基因的方法〔12〕.我们在合成hEPO基固(包括带有信号肽的hEPO基因)时也采用了这两种方法:合成的hEPO基因在大脑杆菌、CHO细胞和昆虫细胞中均得到表达。本文报道hEPO基因的合成及在大肠杆菌中的表达结果。 相似文献
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适体(aptamer)因其与靶分子结合的高亲合力及强特异性,而具有广泛的应用价值。近年来对适体功能的研究多集中在分子和细胞水平,要将适体应用于临床治疗必须进一步对适体在动物体内及人体内的活性功能进行研究。本文对已处于动物实验或临床实验阶段的适体进行综述。 相似文献
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大鼠20α羟类固醇脱氢酶(20α-Hydroxysteroid dehydrogenase,20αHSD)cDNA片段,被插入杆状病毒的转移载体pBlueBacⅢ,经野生型病毒DNA的共转染,从被转染的昆虫细胞中获得重组病毒。Northern blot分析,重组病毒感染细胞有20αHSD基因表达。感染细胞裂解液的Western印迹法分析,37kD的蛋白带被20αHSD抗体识别。体外酶活性测定发现, 相似文献
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对基因工程构建的含人胰高血糖素样肽1(hGLP1)突变体的工程菌株进行诱导表达,分离纯化N末端第二位突变的2GlyhGLP1突变体.IPTG诱导4h,收获的菌体经超声破碎后,裂解液用GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化GST2GlyhGLP1融合蛋白,经CNBr裂解、SephadexG25柱脱盐、QAESepharoseFF阴离子交换柱层析和RPC18柱脱盐,得到纯度大于98%的重组2GlyhGLP1.Western印迹分析证实,该突变体可被特异性hGLP1抗体所识别.生物学活性分析表明,2GlyhGLP1具有明显的降血糖活性和促胰岛素分泌活性(P<0.001). 相似文献
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二肽酶Ⅳ的结构与功能 总被引:2,自引:0,他引:2
二肽酶Ⅳ (dipeptidylpeptidaseⅣ ,DPPⅣ ;EC3.4 .14.5 /CD2 6 )是由Hopsu Havu和Glenner在鼠肝脏组织匀浆过程中发现的 ,它能从甘氨酰 脯氨酰 2 萘酰胺 (gly Pro 2 naphthylamide)底物中水解 2 萘酰胺 ,最初被称为甘氨酰脯氨酸萘酰胺酶 (glycylpro linenaphthylamidase) ,后被证明广泛存在于肾脏、胃肠道、结缔组织、淋巴结等组织中 ,唾液及血液中也含有此酶。凡N末端数第二位上存在脯氨酸 (Pro)或丙氨酸 (Ala)的多肽是该酶发挥活… 相似文献
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IκB激酶-α(IKKα)的功能与淋巴形成和乳腺发育相关,在乳腺肿瘤中观察到IKKα蛋白的过量表达.应用小鼠受精卵卵周隙注射慢病毒载体的方式,建立IKKα基因RNAi转基因小鼠模型,为在体内研究IKKα基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件.实验构建了针对IKKα基因RNAi(剔降)的慢病毒载体,并将载体导入小鼠受精卵卵周隙,获得携带该载体的转基因小鼠模型,经PCR鉴定首建鼠阳性率为15%.转基因小鼠外周血细胞IKKαmRNA表达量明显降低.初步表型观察分析,IKKα基因RNAi小鼠发育正常,进一步的分析工作正在进行中. 相似文献
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人雄激素受体(hAR)为甾体激素受体超家族的成员之一,由一条多肽链组成,分三个功能区:N端区、DNA结合区和激素结合区。C端的激素结合区,是与雄激素结合并介导其发挥生物学效应的关键区域,在目前导致男性两性畸形的主要疾病雄激素抵抗症的研究中发现,该区域内的基因突变是导致雄激素与hAR结合异常的主要原因,但这种由基因突变引起的结合异常的分子机制尚不清楚。根据由hARcDNA推演的氨基酸序列分析表明,hAR分子中不存在二硫键,且氨基酸残基上无糖基化修饰。 以前,由于hAR在组织中含量极低且极易 相似文献
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大鼠20α羟类固醇脱氢酶(20α-Hydroxysteroiddehydrogenase,20αHSD)cDNA片段,被插入杆状病毒(BacuIovirus)的转移载体pBlueBacⅢ,经野生型病毒DNA的共转染,从被转染的昆虫细胞中获得重组病毒。Northernblot分析,重组病毒感染细胞有20αHSD基因表达。感染细胞裂解液的Western印迹法分析,37kD的蛋白带被20αHSD抗体识别.体外酶活性测定发现,感染细胞裂解液中含有20αHSD酶促活性以上结果提示,大鼠20αHSD在杆状病毒昆虫表达系统成功地获得表达,为今后大量制备和纯化20αHSD创造条件。 相似文献
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为了建立中枢神经系统肿瘤小鼠模型,构建了大鼠神经元特异性烯醇化酶(ratneu-ron-specificenolase,NSE)基因启动子调控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simianvirus40largeTantigengene,SV40TAg)转基因载体,通过受精卵雄原核显微注射的方法制备转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型;RT-PCR和Northern印迹检测转基因阳性鼠中SV40TAgRNA水平的表达及其组织特异性;免疫组化检测其蛋白质水平的表达。经显微注射共获得9只首代转基因阳性鼠(首建者,Founder小鼠),其中2例出生时即发生神经干细胞来源的肿瘤,其他Founder小鼠经繁育后共建立了5个SV40TAg转基因小鼠系,其中有4个系检测到SV40TAgRNA水平的表达且特异性地表达于脑组织,但未检测到蛋白质水平的表达。研究表明NSE启动子活性具有较强的组织特异性,并起始于小鼠胚胎发育期;SV40TAg具有明显的致癌作用,且SV40TAg诱发的神经系统肿瘤易造成转基因小鼠早期死亡。 相似文献