小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养技巧及经验总结

RAW264.7细胞具有很强的黏附和吞噬抗原的能力,是研究微生物学、免疫学的常用细胞株.很多研究者发现这种细胞形态极不稳定,细胞状态的评价也很困难.本文作者结合RAW264.7培养经历及文献资料探讨RAW264.7细胞培养的经验教训和评价细胞状态的方法,旨在为培养该细胞的科研工作者提供一定的借鉴.     

壳聚糖-海藻酸钠包裹Hp全菌蛋白微球剂的研制及其表征分析

肽抗生素 (peptideantibiotics)为生物体基因编码的具有抗生素样活性的肽类物质 ,是生物体天然免疫的重要组成部分 ,分布广泛 ,目前已分离到 80 0多种。肽抗生素具有抗菌活性强、抗菌谱广、不易产生耐药性等优点 ,潜在巨大的应用开发价值。为高效率制备肽抗生素 ,利用同尾酶PstⅠ和AvaⅢ能产生相同粘端的特性 ,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等多次基因操作 ,构建含 1～ 8个拷贝的人肽抗生素hPSB β基因串联体重组质粒 ,经酶切、DNA测序分析表明各串联体的DNA序列及阅读框完全正确。将各重组子转化大肠杆菌 ,用IPTG诱导表达 ,Tricin…     

幽门螺杆菌尿素酶B单位DNA疫苗的构建及鉴定

定植于人胃粘膜的幽门螺杆菌是导致慢性感染的最常见病原微生物之一 ,全世界约有 5 0 %以上的人感染过Hp。 1994年世界卫生组织 (WHO)把Hp列为一类致癌因子。目前用抗生素等治疗Hp感染存在一些缺陷 ,因此研制预防和治疗性Hp疫苗具有重要的意义。本研究首先用PCR法扩增获得了ureB基因 ,亚克隆至pMD 18载体 ,并最终将ureB基因克隆至真核表达载体pTCAE。对阳性克隆子pT ureB用PCR、酶切及测序的方法进行了鉴定 ,鉴定后的 pT ureB即为候选的Hp核酸疫苗。进一步将疫苗体外转染CHO细胞 ,用抗UreB多抗检测培养上清 ,证实了UreB蛋白的…     

幽门螺杆菌液体培养工艺的研究*

Hp的液体培养尤其是大规模培养仍存在许多问题。通过单因子试验统计分析,优化筛选了适于幽门螺杆菌的液体培养基和摇瓶培养条件。结果表明,在适宜的摇瓶培养条件下,Hp能够在添加β-环糊精(β-Cyclodextrin,β-CD)的布氏肉汤中很好地生长,菌体收获量达到0.6g/mL。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7 TCCP蛋白研究进展

TCCP(內膜素受体偶联细胞骨架蛋白,Tir couple cytoskeleton protein)是近年研究新发现的EHEC(肠出血性大肠杆菌)O157∶H7致病分子,它经大肠杆菌Ⅲ型分泌系统转导入宿主细胞内,结合并活化宿主蛋白N-WASP(神经威奥综合症蛋白),引起肌动蛋白的聚集,最终诱导特征病理改变黏附、擦拭(A/E)损伤的形成。本文就近年来对它的研究情况作一简要综述。     

新型疫苗佐剂的研究进展

与传统的灭活或活体疫苗相比,由基因工程重组抗原或化学合成多肽组成的现代疫苗往往存在免疫原性弱等问题,需要新型的免疫佐剂来增强其作用。尽管传统的铝盐佐剂是目前唯一全球公认的人用佐剂,但存在激发细胞免疫应答能力差等不足,因此,需要研发更为安全有效的人用新型佐剂,尤其是安全无毒、能够刺激较强细胞免疫应答的佐剂,以及适合粘膜疫苗、DNA疫苗和癌症疫苗的免疫佐剂。分析阐述了新型佐剂研究状况和佐剂发展方向,并进一步对新型佐剂的临床前和临床试验研究以及已批准上市的新型疫苗佐剂进行了综述。     

治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的抗体药物

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA) 作为超级细菌的典型代表,严重威胁人民群众的健康。目前经典的抗生素治疗和疫苗主动预防都无法有效控制MRSA的感染。近年来,随着抗体药物产业的兴起,诸多药物研发公司和研究人员致力于研究治疗性抗体,以期控制MRSA的感染并已经取得了很多突破。就治疗MRSA感染的抗体药物研究进展作一简要综述。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究

通过不同培养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)基因工程菌的菌体生长与外源蛋白表达量的影响的比较 ,建立了稳定、适宜的幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因工程菌发酵工艺。多批实验结果证明 ,菌体单产可达 86 g/L ,目的蛋白的表达率为 38.2 %。     

人幽门螺杆菌保护性抗原Hsp A基因克隆的研究

人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori.HP)为上消化道疾病的重要致病菌,已确定为慢性胃炎的主要病因,许多消化道溃疡伴有HP感染。WHO把HP列为与胃癌密切相关的病原菌,同时将其列为一级致癌因子(grade Ⅰ carcino-gen);HP是世界上感染率最高的细菌之一,中国人群的感染率为21％～93％。目前任何一种抗生素对HP的根除率均未超过30％,只好寻求多联药物治疗,但仍具有明显不足;如毒副作