蛋白质的双相凝胶电泳

双相凝胶电泳由于它分辨力高、重复性好、方法灵敏,已成为蛋白质研究的一种十分有用的工具,广泛地应用于生物化学、分子生物学和植物生理学的研究中。有人把双相凝胶电泳与计算机分析结合起来,用于复杂蛋白质组分的分离和鉴定,使双相凝胶电泳的应用具有更加广阔的前景。     

用高效液相色谱法对FAD和FMN的分离测定

在生物体内,许多酶蛋白只有在辅酶的参与下,才能发挥其催化作用。黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤核苷酸(FAD)是黄素酶类的重要辅基,其生理功能是起传递质子的作用。因此,分离测定生物组织中的FAD与FMN的含量,对于深入研究生物体新陈代谢及黄素酶类的作用机制是十分重要的。由于它在生物组织中含量极低,虽然有薄板层析分析和离子交换树脂层析法分离,但是样品量大,测定时间长,准确度低。我们借鉴Light等的方法,采用HPLC对FAD和FMN进行分离和     

蔗糖密度梯度离心法测定蛋白质的沉降系数

沉降系数(S值)是蛋白质的一个重要物理常数,一般在分析超迷离心机中进行分析。由于分析超速离心机需要配备特殊的分析转头和监测记录沉降粒子在离心过程中行为的装置,价格昂贵,一般实验室难以配备。Martin和Ames使用制备超速离心机,采用蔗糖密度梯度超离心法,测定了细菌组氨酸生物合成的有关酶的沉降系数,取得了较好的效果。我们参照该方法,并作了某些改进,现报告如下。     

热带假丝酵母(Candida tropicalis)79微体蛋白质组分的分析研究

纯化的微体,经过渗透休克、反复洗涤,被分成微体膜和可溶性组分两部分。它们的蛋白质含量分别占微体蛋白质总量的70%和30%左右。酶学分析表明,过氧化氢酶和尿酸氧化酶主要分布在微体可溶性部分,NADH-细胞色素c还原酶(抗霉素不敏感型)可能是与微体膜相连结的蛋白质。用淀粉凝胶分离、普鲁士蓝染色的方法,在微体可溶性部分检出两种不同类型的过氧化氢酶。经SDS-PAGE分析,微体膜显示出25条蛋白亚基带,可溶性部分显示出21条蛋白亚基带。微体蛋白亚基分子量范围在14K～140K之间。其中,33K蛋白亚基是微体膜的主要结构蛋白;24K、26K和33K蛋白亚基为糖蛋白;63K和36K蛋白亚基分别是过氧化氢酶和尿酸氧化酶。在双相凝胶电泳图谱上,微体膜出现110个斑点,可溶性部分出现59个斑点。过氧化氢酶和尿酸氧化酶在双相凝胶电泳图谱中的位置都已确定。采用交叉免疫电泳的方法,研究了微体蛋白质在酵母生长过程中的变化。结果表明:热带假丝酵母79培养18小时,微体发育成熟;36小时后,微体开始降解。