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目的:构建sh Hipk2慢病毒表达载体,并探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein 2,HIPK2)在七氟醚诱导的原代海马神经元凋亡中的作用。方法:设计并构建针对HIPK2靶基因的慢病毒,转染至原代海马神经元,通过免疫荧光检测转染效率,应用RT-PCR验证干扰效果。病毒转染3 d后,处理组经过4.1%的七氟醚暴露6 h后,进行相应的检测。采用CCK8比色法检测各组细胞活性,LDH检测细胞毒性,FITC/PI流式细胞仪及Western Blot检测细胞凋亡。结果:RT-PCR显示较Scr组与Con组相比,sh HIPK2组HIPK2 m RNA水平明显下降(P0.0001),干扰效率为75.29%,提示靶向沉默HIPK2的慢病毒sh RNA表达载体构建成功。Scr+Sev组细胞活力较Scr组相比显著下降而细胞毒性明显增加(P0.05),sh HIPK2+Sev组与sh HIPK2组相比细胞活力与细胞毒性均无统计学差异(P0.05)。流式凋亡细胞检测结果显示Scr+Sev组凋亡细胞数明显高于Scr组(P0.05),而sh HIPK2+Sev组与Sh HIPK2组相比无统计学差异(P0.05)。Western Blot结果显示Scr+Sev组Cl-caspase 3蛋白水平较Scr组相比明显升高,sh HIPK2+Sev组与sh HIPK2组相比无统计学差异(P0.05)。结论:HIPK2可促进七氟醚引起的原代海马神经元的凋亡。 相似文献
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每年有大量的婴幼儿在全身麻醉下接受各种检查和治疗,麻醉药物的安全问题也成为人们日益关注的问题,全麻药物作用于发育期大脑是否会产生持续性不可逆损伤这一问题,被学者所担忧。虽然动物研究提示了全麻药物具有神经毒性,但临床研究结论并不一致,需要有更多的研究予以探索,并通过合理的用药手段、保护手段,将麻醉药品的副作用降低到最低。本文从基础研究和临床研究方面,简述了当前全身麻醉药对神经发育影响的研究现状,介绍了现有研究的成果和局限性。分析了全麻药物神经毒性可能存在的时间依赖性和剂量依赖性。目前更多的研究趋向于单次、相对短时间的麻醉下手术对神经发育影响很小,未来期待更多的研究予以探索全麻药物神经毒性作用,特别是大剂量重复麻醉暴露对发育期神经的生长影响,从而更好地指导临床治疗。 相似文献
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