植物乳杆菌环二腺苷酸合成酶的克隆表达与活性分析

【背景】环二腺苷酸(Cyclic Diadenosine Monophosphate,c-di-AMP)是一种主要存在于革兰氏阳性菌中的重要的第二信使分子,其参与细菌的生长、生存、抗逆性等多种生理活动,但目前关于乳酸菌中c-di-AMP的研究甚少。【目的】从植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)中克隆得到c-di-AMP合成酶基因,在大肠杆菌中进行可溶性表达并研究其体外活性。【方法】使用高效液相色谱以及质谱分析对植物乳杆菌-YRA7细胞内容物中的c-di-AMP进行检测;以植物乳杆菌-YRA7基因组DNA为模板,克隆c-di-AMP合成酶基因(lpDacA),构建重组表达载体pET-28a-lpDacA并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析纯化后进行体外活性研究。【结果】在植物乳杆菌中检测到c-di-AMP分子;成功构建了c-di-AMP合成酶基因的重组表达质粒,该重组蛋白在大肠杆菌中得到可溶性表达;体外活性分析显示,该重组蛋白可以催化ATP生成c-di-AMP,其活性依赖于二价阳离子的存在,在Mg~(2+)存在以及碱性环境下活性较强;RHR是合成酶活性的关键基序,是环二腺苷酸合成酶与ATP的结合位点。【结论】植物乳杆菌c-di-AMP合成酶的克隆表达及活性分析为进一步研究c-di-AMP在植物乳杆菌中的作用奠定了基础。     

铁死亡参与油酸诱导的小鼠急性肺损伤（英文）

本研究旨在探讨铁死亡在油酸(oleic acid, OA)致急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠模型中的作用。小鼠尾静脉注射纯OA制备ALI模型,以肺组织病理学评分、肺湿干重比、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)蛋白含量作为ALI的评价指标,用试剂盒检测肺组织的铁浓度、谷胱甘肽(glutathione, GSH)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量,用透射电子显微镜观察肺细胞的超微结构,用定量PCR (q-PCR)检测肺组织中前列腺素内过氧化物合酶2 (prostaglandin-endoperoxide synthase 2, PTGS2) mRNA表达,用Western blot测定肺组织谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)、铁蛋白和转铁蛋白受体1 (transferrin receptor 1, TfR1)的蛋白表达水平。结果表明,OA组小鼠肺组织病理评分、肺湿干重比和BALF中蛋白均高于对照组。OA组小鼠肺细胞线粒体缩小,线粒体膜破裂。与对照组相比,OA组PTGS2 mRNA表达增加7倍。OA组小鼠肺组织出现铁过载、GSH含量减少和MDA累积。与对照组相比,OA组小鼠肺组织GPX4和铁蛋白表达水平下调。以上结果提示,铁死亡可能在ALI发病机制中发挥作用,这为治疗ALI的新药开发提供了新的角度。     

基于LUCC 的兰州城市生态系统服务价值动态分析

生态脆弱型城市生态系统服务价值评估是保育和合理开发城市生态系统的重要基础。构建典型生态脆弱型城市生态服务价值评估模型, 以兰州城市生态系统为例, 运用GIS 和遥感技术分析LUCC 特征, 计算1989 年、1999 年和2009 年6 类主要土地利用类型的9 项生态系统服务项目价值。结果表明: 1)20a 间兰州市耕地面积减少幅度最大为42.54%, 水体湿地、草地次之。总价值呈现出先增加后减少的趋势, 1999 年兰州城市生态服务价值最大为4.4377×108元, 2009 年生态服务价值是1989 年的1.5 倍。2)土壤形成与保护服务功能价值占总价值的比例最高约20%, 食物生产和娱乐文化服务功能价值占总价值比例较低为3.7%、3.4%, 气体调节、娱乐文化和原材料生态服务价值增幅最大。3)各年份林地、草地、耕地和水体湿地生态服务价值均为总价值构成的主要部分, 林地和草地生态系统对总服务价值的贡献率最高。城市扩张中应注重林草地的保育与合理规划。4)价值系数敏感性检验表明, 生态系统服务价值对其缺乏弹性, 模型能够合理评估该区域生态服务价值波动。     

短尾铁线莲叶绿素荧光特性研究

运用便携式光合气体分析系统(LI-6400)对短尾铁线莲(Clematis brevicaudata)的叶绿素荧光动力学曲线、淬灭分析、荧光光曲线以及荧光ACI曲线等生理特性进行测定和对比分析。结果表明:随光照时间的增加,短尾铁线莲的荧光参数ETR、qP和NPQ逐渐上升并在28 min左右达到稳定。最大荧光产量Fm′在叶片转入黑暗后逐渐上升,在52 min左右趋于稳定;NPQ则开始下降,在50 min左右达到稳定。PhiPS2和PhiCO2呈线性正相关(P<0.01)并随着光照强度的增加而减小。短尾铁线莲对CO2浓度的变化十分敏感,在50~200μmol.mol-1范围内,CO2浓度的增加可显著提高其PhiPS2和PhiCO2的值,增加CO2浓度是提高短尾铁线莲光合速率的有效途径。